试剂盒组成成分
1、 左臂———线性化的三合一质粒:质粒含CMV启动子驱动的人源化Cas9n(Cas9 缺口酶)
表达元件、 人U6启动子驱动客户特异sgRNA表达 (待重组) 的表达元件以及如下的抗性基
因表达元件:
SV40 启动子驱动的Neomycin 抗性基因表达元件
EF1a 启动子驱动的 Puromycin 抗性基因表达元件
2、 右臂———线性化的三合一质粒: 质粒含CMV 启动子驱动的人源化Cas9n (Cas9 缺口酶)
表达元件、 人U6启动子驱动客户特异sgRNA表达 (待重组) 的表达元件以及如下的以非洲
爪蛙EF1a 启动子驱动的荧光报告基因的表达元件。
eGFP (绿色荧光蛋白)
mCherry (红色荧光蛋白)
eCFP (青色荧光蛋白)
eYFP (黄色荧光蛋白)
3、1 退火缓冲液
4、T4 连接酶
5、5 T4连接缓冲液
6、正向引物F-lk(用于验证客户gRNA重组后获得的质粒)
7、超纯水