Canine Pancreatic Microsomal Membranes

Y4041的产品组分
1 x50ul             Canine Microsomal Membranes
1 x5ug              Signal Sequence Control mRNA
1 x1ug              Glycosylation Control mRNA

微粒体囊泡被用于研究蛋白质的协同翻译和翻译后加工的初始过程。在微粒体膜存在下，可通过合适的mRNA在体外翻译来检验蛋白加工程序，这些程序包括信号肽切割、膜插入、移位和核心糖基化。另外，也可以用Canine Pancreatic MicrosomalMembranes(a)(犬胰微粒体膜)结合TNT® Lysate Systems(TNT®裂解物系统)对合适的DNA模板进行转录/翻译反应，从而研究加工和糖基化过程。为了保证连续操作时翻译反应中的抑制作用最小、本底最低，制备微粒体时去除了污染的膜片段以及内源性的、结合在膜上的核
糖体和mRNA (1)。使用两种不同的对照mRNA模板，对膜制备物的信号肽酶和核心糖基化活性进行了检测。这两种对照mRNA是E. coli的b-内酰胺酶(或氨苄青霉素抗性基因产物)前体，以及啤酒酵母(S. cerevisiae)的a-配合因子(或a-因子基因产物)前体。从含有编码大肠杆菌b-内酰胺酶(氨苄青霉素抗性基因产物)前体的基因序列的质粒上，使用SP6 RNA聚合酶可转录得到对照信号序列mRNA(大肠杆菌b -内酰胺酶)。合成的RNA不含有帽类似物。Canine Pancreatic Microsomal Membranes System(犬胰微粒体膜
系统)中包含该对照mRNA，用于检测信号肽酶活性。从含有啤酒酵母(S. cerevisiae)a-配合因子(a-mating factor)编码区的质粒上，使用SP6 RNA聚合酶可转录得到Core GlycosylationControl mRNA (S. cerevisiae a-factor)(对照核心糖基化mRNA(啤酒酵母的a-因子))。合成的RNA不具有类似帽子结构CaninePancreatic Microsomal Membranes System(犬胰微粒体膜系统)中包含该对照mRNA，用于检测心糖基化活性。

特点
  • 可靠：制备微粒体时去除了内源性的、结合在膜上的核糖体和mRNA，以确保微粒体膜的性能稳定，且对翻译反应的抑制作用最小、本底最低，并已使用兔网织红细胞裂解物系统检测过。

用途
  • 检查信号肽切割、膜插入、移位和核心糖基化。
  • 与TNT® Lysate Systems(TNT®裂解物系统)、Rabbit Reticulocyte Lysate(兔网织红细胞裂解物)和Flexi® Lysate  (Flexi®裂解物系统)兼容。

操作手册       Technical Manual TM231

储存条件：储存于-70℃或以下。组分中的微粒体膜可在-70℃稳定一年。解冻后，未使用的部分应快速在液氮中冷冻。反复冻融2次后未检测到活性损失。

参考文献
1. Walter, P. and Blobel, G. (1983) Meth. Enzymol. 96, 84–93.

技术资料       Promega Notes PN070

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