英文名称： Yeast Genomic DNAKit
试剂级别： 分子生物学级
北京厚生博泰科技有限公司
Beijing Hooseen Biotech Co.,Ltd
酵母基因组DNA提取试剂盒
Yeast Genomic DNAKit
(目录号：HS0303)
产品包装
| 试剂盒成分 | 50 preps |
| Buffer GA | 15 ml |
| Buffer GB | 15 ml |
| Buffer GD | 30 ml |
| Buffer PW | 60 ml |
| Buffer EB | 15 ml |
| Proteinase K | 1 ml |
| Spin Columns CG | 50个 |
| Collection Tubes (2ml) | 50个 |
自备试剂
山梨醇Buffer、溶壁酶、无水乙醇、RNase A（可选）。
储存条件
蛋白酶K：-20℃，其他组分室温（15~25℃）
产品简介
本试剂盒适用于从酵母菌中制备高质量的基因组DNA。独特的缓冲液/蛋白酶K体系能迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA在高盐状态下选择性吸附于硅基质膜上，再通过快速的漂洗、离心步骤，去除酵母细胞代谢物和蛋白等，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱下来。
使用本试剂盒可获得高质量的酵母基因组DNA，可直接进行PCR、酶切和杂交等分子生物学实验。
产品特点
1.简便快速：1小时内即可获得高质量的酵母基因组DNA。
2.质量好：可直接进行PCR、酶切和杂交等分子生物学实验。
下游应用
1.PCR、荧光定量PCR。
2.酶切、文库构建、Southern杂交。
注意事项
1. 如BufferGA和Buffer GB产生沉淀，可在56℃水浴溶解。
2.样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DN**段小，提取量下降。
3. 所有离心步骤均为台式离心机，室温下操作。
操作步骤
1. 取1 ~ 5 ml酵母培养物，室温12,000 rpm离心1 min，弃上清。
（注意：根据菌液的浓度决定取液量，对于酿酒酵母，OD600 =1.0时，相当于1 ~2×107细胞/ml，最多不要超过5×107细胞）
2. 酵母细胞壁的去除：向菌体中加入600 ul Lyticase WorkingBuffer，使用前加入β-***，使其终浓度为0.1%，并加入5 ul Lyticase，充分混匀，30℃处理30min。4000 rpm离心10 min，弃上清，收集沉淀。
（注意：以上为5×107细胞Lyticase用量，根据酵母的菌株和酵母细胞的数量不同，所用Lyticase的浓度和处理时间应进行适当调整）
3. 向沉淀中加入200 ul Buffer GA，用枪头充分吹打或用涡旋振荡器充分悬浮。
4. 加入20 ul蛋白酶K溶液，充分混匀。
5. 加入200 ul Buffer GB，充分混匀，70℃放置10min，期间每隔一段时间震荡离心管，溶液变得清亮后短暂离心，以去除管盖内壁的水珠。
（注意：BufferGB加入时可能会产生白色沉淀，一般70℃时会消失，不影响后续实验，如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取的DNA量少或者提取的DNA不纯）
6. 加入200 ul无水乙醇，充分震荡，此时可能会出现絮状沉淀，短暂离心以去除管盖内壁水珠。
7. 将一个Spin Columns CG放入CollectionTubes中，将上一步所得溶液和絮状沉淀转移到离心吸附柱中，12,000 rpm离心30sec，弃收集管中的废液。
8. 向吸附柱内加入500 ul的Buffer GD，室温12,000 rpm离心30 sec，弃收集管中废液。
（注意：Buffer GD中含有乙醇，用后及时盖紧，以防乙醇挥发）
9. 向吸附柱内加入500 ul的Buffer PW，室温12,000 rpm离心30 sec，弃收集管中废液。
（注意：Buffer GD中含有乙醇，用后及时盖紧，以防乙醇挥发）
10. 重复步骤9一次。
11. 室温12,000 rpm离心2 min，甩干残留液体。
（注意：此步不能省略，否则残留乙醇会影响质粒的后续使用）
12. 将离心吸附柱置于一个新的1.5 ml塑料离心管（自备）中，加入50 ~ 200 ul的Buffer EB，室温放置2 ~5min。12,000 rpm离心1 min，离心管底溶液即质粒DNA。
（注意：为增加洗脱效率，可将洗脱液在50~60℃预热。如需使用去离子水洗脱，可用NaOH调整其pH值在7.0~ 8.5之间，为了增加质粒回收率，可将得到的溶液重新加入到离心管中，室温放置2min，再次离心收集）
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