Altered Sites® II-Ex1 invitro Mutagenesis System

Altered Sites® Ⅱ in vitro Mutagenesis Systems (a, b)(Altered­Sites® Ⅱ体外突变系统)提供了一种制备和筛选寡聚核苷酸介导的突­变的高效方法。该系统能够突变双链模板DNA，在进行下一轮突变时­不需要进行亚克隆，也不需要体内或体外都能表达突变基因产物。­Altered Sites® Systems使用抗生素筛选的方法可得到高频率突­变。pALTER®-1Vector(在Cat#.Q6210中提供)含有氨苄青霉素和四­环素抗性基因，但是氨苄青霉素抗性基因是被失活的。在突变反应­中，Ampicillin Repair Oligonucleotide(氨苄青霉素修复寡核苷酸)在­突变反应中恢复了突变链的氨苄青霉素抗性。该寡聚核苷酸和突变核­苷酸同时与单链或双链DNA模板退火杂交。接下来突变链的合成与­连接使两者相连。在突变反应过程中，这些相应的寡聚核苷酸可以同­时使用，以使一个抗性基因失活的同时修复另一个。利用这种方法，­不用亚克隆就可以在同一个质粒上进行下一轮突变和筛选。­pALTER® - Ex1Vector(Cat.# Q6090提供)是由pALTER® -1载体­派生出来的，含有在E. coli体内和体外表达蛋白的相应的转录和翻译­信号。每一种Altered Sites® II System均提供合适的突变寡聚核苷­酸，既能失活也能恢复所提供的载体中的抗生素抗性基因。­注意：这些系统中不含有感受态细胞。

特点­ 

• 高效：单碱基改变的突变效率可高达90%。­ 

• 简便：可使用双链或单链DNA作为模板。突变链的阳性选择标记使筛选更简便、更高效。­ 

• 灵活：能同时产生多点突变、缺失或插入。不用亚克隆就可以在同一个质粒上进行下一轮突变和筛选。

用途­ 

• 产生定点突变。­ 

• 体内或体外突变蛋白的表达。­ 

• 反式调控元件的表达。

操作手册    Technical Manual TM001

储存条件：细菌菌株储存于-70℃；其它组分储存于-20℃。­GenBank® /EMBL Accession Number: pALTER® -1, X65334;­pALTER® -Ex1, U47102; pALTER® -Ex2, U47103.

技术资料   Promega Notes PN061

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