Altered Sites® II invitro Mutagenesis System

Q6210的产品组分
1 x10mg R408 Helper Phage DNA
1 x1ml R408 Helper Phage
1 x100u T4 DNA Ligase
1 x500u T4 DNA Polymerase
1 x75ml Anneal 10X Buffer
1 x100ml Synthesis 10X Buffer
1 x20mg pALTER®-1 Vector
1 x500ml Bacterial Strain JM109
1 x200ml Bacterial Strain ES1301 mut S
1 x30ml Ampicillin Knockout Oligonucleotide
1 x30ml Ampicillin Repair Oligonucleotide
1 x30ml Tetracycline Knockout Oligonucleotide
1 x30ml Tetracycline Repair Oligonucleotide

Altered Sites® Ⅱ in vitro Mutagenesis Systems (a, b)(Altered Sites® Ⅱ体外突变系统)提供了一种制备和筛选寡聚核苷酸介导的突变的高效方法。该系统能够突变双链模板DNA，在进行下一轮突变时不需要进行亚克隆，也不需要体内或体外都能表达突变基因产物。Altered Sites® Systems使用抗生素筛选的方法可得到高频率突变。pALTER®-1Vector(在Cat#.Q6210中提供)含有氨苄青霉素和四环素抗性基因，但是氨苄青霉素抗性基因是被失活的。在突变反应中，Ampicillin Repair Oligonucleotide(氨苄青霉素修复寡核苷酸)在突变反应中恢复了突变链的氨苄青霉素抗性。该寡聚核苷酸和突变核苷酸同时与单链或双链DNA模板退火杂交。接下来突变链的合成与连接使两者相连。在突变反应过程中，这些相应的寡聚核苷酸可以同时使用，以使一个抗性基因失活的同时修复另一个。利用这种方法，不用亚克隆就可以在同一个质粒上进行下一轮突变和筛选。pALTER® - Ex1Vector(Cat.# Q6090提供)是由pALTER® -1载体派生出来的，含有在E. coli体内和体外表达蛋白的相应的转录和翻译信号。每一种Altered Sites® II System均提供合适的突变寡聚核苷酸，既能失活也能恢复所提供的载体中的抗生素抗性基因。

注意：这些系统中不含有感受态细胞。

特点
  • 高效：单碱基改变的突变效率可高达90%。
  • 简便：可使用双链或单链DNA作为模板。突变链的阳性选择标记 
    使筛选更简便、更高效。
  • 灵活：能同时产生多点突变、缺失或插入。不用亚克隆就可以在 
    同一个质粒上进行下一轮突变和筛选。

用途
  • 产生定点突变。
  • 体内或体外突变蛋白的表达。
  • 反式调控元件的表达。

操作手册    Technical Manual TM001

储存条件：细菌菌株储存于-70℃；其它组分储存于-20℃。
GenBank® /EMBL Accession Number: pALTER® -1, X65334;
pALTER® -Ex1, U47102; pALTER® -Ex2, U47103.

技术资料   Promega Notes PN061

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