产品简介

本试剂盒适用于从口腔拭子（棉签刮拭细胞）基因组DNA的广谱性提取试剂盒。试剂盒采用了独特的细胞裂解体系，使蛋白变性，结合硅胶膜特异吸附核酸的原理，快速纯化得到基因组DNA。使用本试剂盒纯化所得的DNA无蛋白、核酸酶污染，可直接进行PCR、酶切和Southern杂交等实验操作。

 

产品特点

n 快速纯化得到高质量、即用型DNA。

n 单个拭子样本得率达到0.5-3.5 μg

n 完全去除污染物和抑制剂，便于下游应用。

 

*1 NB Buffer为裂解液包装规格

*2 RPE Buffer 为去蛋白溶液，可最大限度去除反应液中的蛋白残留

*3 Wash Buffer 为去盐溶液，含有80%乙醇，用于去除盐的残留

*4 Elution Buffer为核酸洗脱液，可用H2O（pH 7.5）替代

 

重要提示：

为保证最大化酸的纯度与得率，必须严格按照实验手册的规定离心时间与转速进行操作，同时做好以下实验准备工作：

n 为防止离心过程中离心管盖断裂，请在离心管壁上也做好样品标记

n Wash Buffer 为12ml溶液，请加入48ml的无水乙醇，并在瓶盖上做好标记，充分混匀后使用。

请准确使用本试剂盒附带的《快速实验操作指南》，当完成一个操作步骤，请在对应的确认框内用记号笔做好标记（标记可以在实验完毕并确认成功后可用75%乙醇去除）。

 

1： 取1个口腔拭子，使用剪刀剪去柄部，将拭子棉签头部放入1.5ml离心管，加入750 μl NB Buffer，浸没棉签部分，充分混匀，60度裂解10分钟，每2分钟使用移液器吸打混匀

 

2： 将上清全部加入Mini Spin纯化柱，室温静置2分钟，12000g离心2分钟，倒掉收集管中的滤过液

n 如果体积大于700 μl，请分多次上柱。

n 室温低于20度时，请将静置时间延长至5分钟。

n 低速离心有助于提高核酸与纯化柱的结合效率。若有些样本的裂解溶液粘稠，可提高离心速度至9000g ，以利于全部过柱。

 

3： 向Mini Spin纯化柱中加入400 μl RPE Buffer，6000g离心1分钟，倒掉收集管中的滤过液

n 为最大限度除去蛋白质和其他杂质，请加入RPE Buffer。

n 室温低于20度时，请静置2分钟。

n 静置与低速离心有助于去除纯化柱上的蛋白质残留。

 

4： 向Mini Spin纯化柱中加入600 μl Wash Buffer，6000g离心1分钟，倒掉收集管中的滤过液

n 室温低于20度时，请将静置时间延长至5分钟。

 

5： 向Mini Spin纯化柱中加入500 μl Wash Buffer，12000g离心2分钟，倒掉收集管中的滤过液

 

6： 开盖12000g离心2分钟，完全挥发乙醇残留

n 为防止离心过程中离心管盖断裂，请在离心管壁上也做好样品标记。

n 从离心机中取出纯化柱时一定要仔细小心，防止滤液接触纯化柱底部或者边缘。一旦接触，请倒掉滤液，重新离心操作。

 

7： 将Mini Spin纯化柱转入一个干净的 1.5 ml 的离心管中，在吸附膜中央加入 30μl Elution Buffer溶液，室温静置 2 分钟后，12000g离心 2 分钟。

n 为提高DNA回收效率，可以使用55度预热Elution Buffer洗脱，Elution Buffer用量不要小于20μl，否则会影响DNA洗脱效率。

n 若提取微量组织的DNA时，请使用本公司的微量组织DNA提取纯化试剂盒。

n 室温低于20度或纯化大于10kb的DNA片段，请在37度温浴3-5分钟后离心。

n Elution Buffer一定要加到柱中央，使之均匀分散渗透，否则会影响洗脱效率。

 

8： 在Mini Spin纯化柱吸附膜中央加入 30 μl Elution Buffer溶液，室温静置 2 分钟后，12000g离心 2 分钟

n 第一次洗脱后重新加入30μl Elution Buffer溶液洗脱，可以提高DNA回收效率。

n 第一次洗脱后将洗脱液重新加入纯化柱离心回收，可以提高DNA回收溶液的浓度。

 

9： 将回收纯化后的DNA溶液进行电泳检测或-20度保存。