Lipo系列高效低毒细胞转染试剂(包教包会) 英文名称: Lipogene |
型号:null 产品货号: 1 |
价格:请致电:010-57128832,18610462672 |
品牌: 上海 |
|
仅供研究使用。不得用于人或动物的治疗或诊断。
LIPOFECTAMINE 2000 转染试剂转染步骤
此实验步骤设计用来进项24孔板贴壁细胞的瞬时或稳定转染,其为设计用来在生长培养基中直接加入复合物。
1.转染前一天,胰酶消化细胞并技术,细胞铺板,使其在转染日密度为90%。细胞铺板在0.5ml含血清,不含抗生素的正常生长的培养基中。参见索莱宝公司制表6了解建议的细胞密度
2.对于每孔细胞,使用50ul无血清培养基(如:OPTI-MEMI培养基)稀释0.8ug-10.ugDNA.多空操作可以批量制备。
3.对于每孔细胞,使用50ulOPTI-MEMI培养基稀释1ul-3ul LIPOFECTAMINE2000试剂。LIPOFECTAMINE2000稀释后,在30分钟内同稀释的NDA混合。保温时间过长会降低活性。可以批量制备。注意:即使LIPOFECTAMINE2000使用OPTI-MEMI稀释,细胞也可以使用D-MEM培养基。如果D-MEM作为LIPOFECTAMINE2000的稀释液,在5分钟内同稀释的DNA混合。
4.混合稀释的DNA(由第2步)和稀释的LIPOFECTAMINE2000(由第3步)。在室温保温20分钟。注意:溶液可能会浑浊,但不影响转染。复合物可以在室温保持6小时稳定。
5.直接将复合物加入到每孔中,摇动培养板,轻轻混匀。注意:如果在无血清条件下转染,使用含血清的正常生长培养基进项细胞铺板。在加入复合物前移去生长培养基,替换为0.5ml无血清培养基。
6.在37℃,5%的CO2种保温24-48小时。无须取代哦复合物或更换培养基。或者在4-5小时后更换生长培养基也不会降低转染活性。
7.在细胞中加入复合物24-72小时后,分析细胞抽提物或进行原位细胞染色,检测报告基因活性。这依赖于细胞类型和启动子活性。对稳定表达,在开始转染一天后讲细胞传代至新鲜培养基中,2天后加入筛选抗生素。进行稳定表达需要数天或数周。
Solarbio table 6 | ||
Cell line | Cills/well(×105) | Lipofectamine2000reagent(ul) |
CHO-S | 1.5 | 2.5-3.0 |
COS-7L | 0.8 | 2.5-3.0 |
293H,293F | 2.0 | 1.5-2.0 |