克必隆eTS PCR法cDNA合成试剂盒
英文名称： 克必隆eTS PCR法cDNA合成试剂盒
型号:null    产品货号： 130404-10
价格:请致电：010-57128832,18610462672
品牌: 中国
试剂级别： 分子生物学级

 克必隆eTS PCR法cDNA合成试剂盒

核酸抽提的常规方法（DNA/RNA），PCR扩增（PCR扩增/条件优化/引物设计），电泳分析，基因克隆（PCR产物），连接转化，阳性克隆鉴定（PCR方法），质粒抽提，质粒限制性酶切

 

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西尼罗河病毒PCR检测试剂盒反应步骤　　

    类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：

1、 模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；

2、模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；

3、西尼罗河病毒PCR检测试剂盒引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的"半保留复制链"，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，每一循环经过变性、退火和延伸，DNA含量既增加一倍。 2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。(Plateau)。到达平台期所需循环次数取决于样品中模板的拷贝。

西尼罗河病毒PCR检测试剂盒工作步骤

标准的PCR过程分为三步：

1.DNA变性（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA

2.退火（复性）（25℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。

3.延伸（68℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右最佳的活性）的作用下，以dNTP为原料，从引物的5′端→3′ 端延伸，合成与模板互补的DNA链。

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