SinoBio Simple Cloning-T (pSI-T) vector克隆及鉴定试剂盒
型号:null    产品货号: T001
价格:请致电:010-57128832,18610462672
品牌: 上海近岸

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T001-01A 20次 500元      
说明书    载体序列
T001-01B A包装×5 2250元
 

 

· T载体 pSC-T说明

SinoBio pSC-T(Simple Cloning T-Vector)是一种PCR产物高效TA克隆的专用T载体,它由pUC18载体改造而成。在PCR克隆构建过程中,为了进一步的克隆步骤,常会在PCR产物的两端引入专门的酶切位点,如T载体上已带有相同的酶切位点,会对下一步的酶切连接带来不利的影响。为消除多克隆酶切位点带来的负作用,SinoBio Simple Cloning T-Vector去除了PCR产物插入区域两侧所有的酶切位点。PCR产物克隆后如果使用其两端的酶切位点进行酶切时,T载体上不会有相同的酶切位点影响酶切反应,可以大大提高酶切效率,增加亚克隆成功率。多克隆位点的消除并不影响β-半乳糖苷酶的正常表达,PCR产物克隆后仍可以利用α-互补性进行蓝白斑筛选,挑选阳性克隆。由于本pSC-T载体上消除了多克隆酶切位点,克隆后的PCR产物将无法使用载体上的限制酶切下,需要在PCR扩增引物上导入合适的酶切位点。

· 产品组成
pSC-T vector(25 ng/μl)    40μl
T4 DNA Ligase                     30μl
2×Quick Ligation Buffer     500μl
10×Ligation Buffer             500μl
Control Insert(50 ng/μl)    10μl
2×Fast Taq Master Mix (Quick Load型)      2×1ml
DL2,000 Plus DNA Marker        100μl

· 质量保证
Control Insert克隆后的白色菌落中,有90%以上含有Insert DN**段。
Control Insert经克隆后,经测序确认“T” 突出的存在。

· 15分钟快速连接
随酶提供独特配方的2×快速及10×普通T4 DNA Ligation Buffer;
使用2X 快速buffer在室温(25°C)下,仅需15分钟即可完成连接反应;

自带超快PCR鉴定2×Fast Taq Master Mix及DNA Marker
2×Fast Taq Master Mix (Quick Load型)已含有PCR反应所需的快速型PCR聚合酶、dNTP混合物、MgCl2、上样染料以及反应缓冲液预先,使用时只需再加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应。其扩增速度为普通Taq酶的数倍,因此可大幅度缩短PCR鉴定过程所需要的时间, 试剂盒自带预混1×Loading Buffer的DL2,000 Plus DNA Marker,能满足绝大部分PCR产物电泳的需要。
 

· T载体 pSC-T相关图片

· 其他说明
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详细内容请参考说明书

OR: black; LINE-HEIGHT: 150%; FONT-FAMILY: 宋体; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Arial; mso-hansi-font-family: Arial; mso-bidi-font-family: Arial">末端加入胸腺嘧***构建的。插入位点单个3`-T的突出端在两方面极大提高了PCR产物与质粒连接的效率。第一,3`-T突出端可以防止载体的自身环化;第二,为某些热稳定性聚合酶产生的的PCR产物提供一个匹配的突出端(1,2)。这些聚合酶常常以模板不依赖模式在扩增产物的3`端加上一个脱氧腺苷酸(3,4)pTARGETTM载体还包含一段经过修饰的β半乳糖苷酶的α肽编码区,从而使重组子也能使用蓝/白筛选。

pTARGETTM载体带有人巨细胞病毒(cytomegalovirus, CMV)即刻早期增强子/启动子区域,能启动克隆DNA的插入片段在哺乳细胞中组成型表达。此载体还含有新霉素***酸转移酶基因,是哺乳动物细胞的一个筛选标记。pTARGETTM载体使用抗生素G-418筛选转染细胞,能用于瞬时表达或稳定表达。

特点

  • 简单的PCR克隆: "T" 突出端允许热稳定性酶如Taq DNA聚合酶生成的PCR产物直接进行连接反应。

  • 强组成型表达: CMV增强子/启动子区域可以在许多细胞类型中进行强组成型表达。在转基因小鼠中,28个检测的组织中有24 个能观察到CMV增强子/启动子调控的氯霉素乙酰转移酶(chloramphenicol acetyltransferase, CAT)基因的表达(5)。此载体在细胞中以游离体形式表达SV40T抗原(SV40 large Tantigen),能获得更高的表达水平。

  • /白斑筛选: 重组子克隆易于筛选。单酶切就能除去插入DNA

  • 稳定的转染子: pTARGETTM 载体含有新霉素***酸转移酶基因,能筛选稳定的转染子。

操作手册 Technical Manual          TM044

储存条件: 感受态细胞储存于70°C;其它组分储存于20°C70°C

参考资料

1. Mezei,L.M.and Storts,D.R.(1994)In:PCR Technology:Current Innovations,Griffin,H.G.and Giffin,A.M.,eds.,CRC Press,Boca Raton,FL,21.

2. Robles,J.and Doers,M.(1994) Promega Notes 45,19-20

3. Clark,J.M.(1998) Nucl.Acids Res.16,9677-86

4. Newton,C.R.and Graham,A.(1994)In:PCR,BIOS Scientific Publishers,Ltd.,Oxford,UK,13.

5. SchmidtE.V.et al.(1990)Mol.Cell.Biol.10,4406-11

技术资料                                          

PCR Cloning System Brochure    BR141

Promega Notes                              PN058,PN082

产品名称

目录号

数量

规格

产地

价格()

 pTARGETTM Mammalian Expression Vector System

A1410

1

20reactions

Promega

2645