yeasenBrand,null 产品货号： 11205ES03Item#, HieffTM qPCR TaqMan Probe Master Mix<br>英文名称： HieffTM qPCR TaqMan Probe Master Mix

Hieff^TM qPCR TaqMan Probe Master Mix

产品信息

产品名称	产品编号	规格	储存	价格（元）
Hieff^TM qPCR TaqMan Probe Master Mix	11205ES03	1ml	-20℃避光	225.00
Hieff^TM qPCR TaqMan Probe Master Mix	11205ES08	5ml	-20℃避光	740.00

产品描述

本产品是探针法2×实时定量PCR扩增的预混合溶液。采用的抗体法热启动UNICON^TM DNA聚合酶（货号：10110AS）可以有效抑制引物非特异性退火导致的扩增。同时，配方优化了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升PCR反应扩增效率的因子，适合低浓度模板的扩增，使定量PCR可以在宽广的定量区域内获得良好的标准曲线。

产品组分

组分编号	组分名称	产品编号/规格
组分编号	组分名称	11205ES03（1ml）	11205ES08（5ml）
11205-A	2×Hieff^TM qPCR TaqMan Probe Master Mix	1ml	1ml × 5
11205-B	50×Low Rox	40μl	200μl
11205-C	50×High Rox	40μl	200μl

运输与保存方式

冰袋运输。-20℃避光储存，有效期1年。本品避免反复冻融。建议分装保存。

反应体系

组分	体积（μl）	体积（μl）	终浓度
2×Hieff^TM qPCR TaqMan Probe Master Mix	10	25	1×
Forward Primer (10μM)	0.4	1	0.2μM
Reverse Primer (10μM)	0.4	1	0.2μM
TaqMan Probe (10μM)	0.2	0.5	0.1μM
50×High or Low Rox	0.4	1	1×
模板DNA	X	X	-
无菌超纯水	to 20	to 50	-

【注】：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。

a) 参比染料：Rox的添加，可根据不同仪器型号进行选择，具体可参考【适用机型】。

b) 引物浓度：通常引物终浓度为0.2μM，也可以根据情况在0.1-1.0μM之间进行调整。

c) 探针浓度：探针终浓度在50nM-250nM之间。

d) 模板浓度：1µg RNA的反转录产物需要稀释10倍左右，以减轻RNA对PCR扩增的抑制。

e) 反应体系：推荐使用20μl或50μl，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

f) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

扩增程序 （两步法程序）

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	1min	1
变性	95℃	10sec	40
退火、延伸	60℃	30sec	40

【注】 a) 预变性时间：根据不同模板和引物的具体情况可适当增加预变性时间至3 - 5min。

b) 退火温度和时间：建议在56-64℃范围内调整。如果反应效果不好，可以适当延长反应时间。

c) 荧光信号采集：请参考仪器设置。

结果分析

定量实验至少需要三个生物学重复。

反应结束后需要确认扩增曲线。进行PCR定量时，需要制作标准曲线。

反应特异性需要琼脂糖凝胶电泳确认。

引物设计指南

1）推荐引物长度25bp左右。扩增产物长度150bp为佳，不要低于100bp，可以在100bp-300bp内选择。

2）正向引物和反向引物的Tm值相差不宜超过2℃。

3）引物碱基分布要均匀，避免出现连续的4个相同碱基，GC含量控制在50%左右。3’端最后一个碱基最好为G或C。

4）引物内部或者正反两条引物间最好避免出现有3个碱基以上的互补序列。

5）引物特异性需要用NCBI BLAST程序进行核对。避免引物3’端有2个碱基以上的非特异性互补。

TaqMan 探针设计指南

1）探针长度一般为18-40bp。探针序列应尽量接近正向或者反向引物，但不能与之有重合区域。

2）探针的退火温度应为 65-67℃。

3）引物碱基分布要均匀，避免出现连续的4个相同碱基。探针5’端应避免使用碱基G。

4）若序列中包含多态性位点，应使其位于探针序列中间。

适用机型

High Rox适用机型： ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™;

Low Rox 适用机型： ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™6,7,12k Flex;

Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™;

不需要Rox校正的仪器型号：

Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon^®,Opticon^® 2, Chromo4™;

Eppendorf Mastercycler^® ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen Corbett Rotor-Gene^® Q, Rotor-Gene^® 3000, Rotor-Gene^® 6000;

Roche Applied Science LightCycler^® 480, LightCycler^® 2.0; Lightcycler^®96;

Thermo Scientific PikoReal Cycler;

Cepheid SmartCycler^®; Illumina Eco qPCR.

注意事项

1. 解冻后Master Mix可能形成沉淀物质，室温短暂放置并上下颠倒混匀至溶液澄清，不影响试剂性能。

2. 推荐使用本公司cDNA合成试剂盒（货号：11104），以有效去除RNA样品中残留的基因组。

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

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HB170518