pGEM^®-T Vector Systems I

A3600的产品组分

1 X1.2ug      pGEM®-T Vector

1 X12ul        Control Insert DNA

1 X100u        T4 DNA Ligase

1 X200ul      2X Rapid Ligation Buffer

A3610包括上面所列的所有组分，还包括:

6 X200ul    JM109 Competent Cells, High Efficiency

说明: pGEM® -T载体系统(a,b)是克隆PCR产物的方便系统。pGEM®-T载体是通过EcoRV酶切pGEM®-5Zf(+)载体，并在两个3`末端加入胸腺嘧***构建的。pGEM®-T载体插入位点3`-T突出端可极大提高PCR产物的连接效率，因为3`-T突出端可以防止载体的自身环化，并且为某些热稳定性聚合酶产生的PCR产物提供一个匹配碱基(1,2)。这些聚合酶常常以模板不依赖模式在扩增产物的3`端加上一个脱氧腺苷酸(3,4)。

pGEM® -T载体多克隆区T突出端的两侧均有BstZI酶切位点，使用BstZI单酶消化即可释放插入片段。也可选用适当的双酶消化释放插入片段。pGEM® -T载体系统II除了pGEM® -T载体系统I所有成分外，还包括JM109感受态细胞。

特点

  • 快速连接: 使用2X快速连接缓冲液（2X Rapid Ligation Buffe）可以使连接反应在室温下1小时内完成。

  • 蓝/白筛选: pGEM® -T载体包含有T7和SP6 RNA聚合酶启动子，分别位于β半乳糖苷酶的α肽编码区内多克隆位点的两侧。α肽的插入失活允许在指示培养基上用颜色直接筛选重组克隆。

  • f1复制起始位点: 可用于制备单链DNA。

操作手册     Technical Manual          TM042

储存条件: 感受态细胞储存于–70°C；其它组分储存于–20°C。

参考资料

1. Mezei,L.M.and Storts,D.R.(1994) In:PCR Technology:Current  Innovations,Griffin,H.G.and Griffin,A.M.,eds.,CRC Press,Boca Raton,FL,21.

2. Robles,J.and Doers,M.(1994) Promega Notes 45,19-20

3. Clark,J.m.(1998)Nucl.Acids Res.16,9677-86

4. Newton,C.R.and Graham,A.(1994)In:PCR,BIOS Scientific Publishers,Ltd.,Oxford,UK,13.