| 出品公司: | TAKARA |
|---|---|
| 载体名称: | pBApo-EF1α-pur |
| 质粒类型: | 哺乳动物细胞表达载体 |
| 高拷贝/低拷贝: | 低拷贝 |
| 克隆方法: | 限制性内切酶，多克隆位点 |
| 启动子: | EF1α |
| 载体大小: | 4972 bp |
| 5 测序引物及序列: | -- |
| 3 测序引物及序列: | -- |
| 载体标签: | 无标签 |
| 载体抗性: | 氨苄青霉素 |
| 筛选标记: | 嘌呤霉素（Puromycin） |
| 克隆菌株: | TOP10, DH5α, JM109 |
| 宿主细胞（系）: | 常规细胞系，293、CV-1、CHO等 |
| 备注: | pBApo-EF1α-pur载体可用来表达microRNA和其它转录产物； 很容易将{promoter+ORF+PolyA signal}框转移到腺病毒 载体上，用于构建腺病毒载体。 |
| 产品目录号: | 3243 |
| 稳定性: | 瞬表达 或 稳表达 |
| 组成型/诱导型: | 组成型 |
| 病毒/非病毒: | 非病毒 |
英文名称： pBApo-EF1α-pur载体哺乳细胞表达载体质粒图谱序列抗性说明书价格报价
试剂级别： 分子生物学级
载体基本信息
载体质粒图谱和多克隆位点信息
载体简介
pBApo-EF1α-pur DNA是一种简单的应用于哺乳动物细胞的基因表达载体。该载体具有人多肽链延伸因子基因来源的启动子 (EF1α promoter)、单纯疱疹 病毒胸苷激酶来源的polyA信号、新霉素抗性基因。通过在MCS区域插入目的基因的开放阅读框 (ORF)，构建目的基因表达载体。除了通常的基因以外该载 体可以用于pri-microRNA的转录。此外，还可以很容易地将 (promoter＋ORF＋PolyA signal) 从这个载体上转移到腺病毒载体上，尤其是转移到 Adenovirus Dual Expression Kit 的组分pAxcwit上。腺病毒载体感染效率高，范围广，可以用于体外和体内的基因转导。 使用方法 1. 插入基因 在质粒载体的克隆位点处插入目的基因的开放阅读框（ORF）。因为载体上有氨苄青霉素抗性基因，可以从大肠杆菌中筛选重组体。 2. 转染 使用 TransIT 系列、Xfect 系列（Clontech）等转染试剂将质粒导入细胞内。转染条件请参考转染试剂的实验流程。 3. 转染细胞的筛选 pBApo-EF1αNeo DNA 具有新霉素抗性基因、pBApo-EF1αPur DNA 具有嘌呤霉素抗性基因，可以利用抗生素筛选转染细胞。 在质粒转染后培养 24 小时以上，开始使用抗生素筛选。在细胞密度较高的情况下，可以适当地稀释细胞后重新培养。每 3～4 天更换含抗生素的培养基 。通常 1～2 周可以获得转染细胞的克隆。由于不同细胞对抗生素的耐药性不同，需要研讨适合的抗生素浓度。通常 NeoR（新霉素）浓度为 500～1,000 μg/ml，PurR（嘌呤霉素）浓度为 1～3 μg/ml。 4. 置换表达框（unit） pBApo-EF1α系列载体经过 Cla I 或 EcoR V 酶切，将表达框（unit）（EF1a promoter+插入基因+PolyA signal）从质粒中切出，可以轻易地转移至其 他载体上。特别是 Adenovirus Dual Expression Kit，该载体多克隆位点上有 Cla I 和 Smi I 酶切位点，可以很轻易地将表达框转移至腺病毒载 体上。（EcoR V 和 Smi I 都产生是平滑末端，适合片段与腺病毒载体连接）
载体序列
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