SYBR Green qPCR Mix

 

货号	规格	价格
P2091	1 ml（40次，50 μl体系/次）	300
P2092	1 ml×5（200次，50 μl体系/次）	1350

 

产品组分

P2091

2×SYBR Green qPCR Mix      1 ml      1支

超纯水                                     1 ml      1支

 

P2092

2×SYBR Green qPCR Mix    1ml    1支×5

超纯水                                1 ml    1支×5

注： 本产品份体系中包含溴酚蓝、不含溴酚蓝两类。体系中包含溴酚蓝的产品，PCR扩增产物可直接电泳检测。这两类产品的扩增性能无差异。如没特别说明提供体系中包含溴酚蓝的包装。

 

保存条件

  -20℃避光保存2年。

  请勿保存于-70℃，防止反复冻融导致酶活降低。

 

产品说明

    SYBR Green qPCR Mix是2×浓缩的实时定量PCR扩增的预混和溶液，含有Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、缓冲液、酶抗体、SYBR^® Green I等扩增必需组分（模板与引物除外）。使用时，仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行实时定量PCR，大大简化操作过程，缩短操作时间，降低污染（加样次数减少）。利用特异性的酶抗体封闭低温条件下Taq DNA聚合酶的活性，防止形成非特异性扩增。本产品与绝大多数厂商的实时荧光定量PCR仪兼容，如Applied Biosystems、Eppendorf、Corbett、Bio-Rad和Roche。

Taq DNA聚合酶是嗜热性细菌Thermus aquaticus来源的热稳定重组型Taq DNA聚合酶，分子量为94 KD。扩增片段的长度可达5 kb（简单模板）。延伸速度为0.9-1.2 kb/分钟（70-75 ℃）。该酶具有5’→3’聚合酶活性，无3’→5’外切酶活性。

SYBR^® Green Ⅰ是一种结合于DNA双螺旋小沟中的双链DNA结合染料。与双链DNA结合后，其荧光大大增强。这一性质使其用于PCR扩增产物的检测非常理想。SYBR^® GreenⅠ的最大吸收波长约为497 nm，发射波长最大约为520 nm。在PCR体系中，只有掺入DNA双链的SYBR^® GreenⅠ才能发射强荧光信号，而不掺入链中的SYBR^® Green Ⅰ染料分子仅有微弱荧光信号背景，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加同步。

 

产品特点

• 特异性高：热启动功能与优化缓冲液可防止非特异性扩增和形成引物二聚体。
• 敏感性：   可检测低拷贝模板。
• 线性范围广：可精确定量9个数量级。
• 通用性好：几乎兼容所有实时荧光定量PCR仪。
• 可重复性、使用方便：即用型2×Mix，减少加样错误和反应体系配制时间。

 

产品用途

• 实时PCR（使用YBR^® Green Ⅰ）
• 实时RT-PCR（使用YBR^® Green Ⅰ）

 

质量控制

    相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染；功能测试：qPCR分析扩增的特异性、敏感性与可重复性。

 

2×SYBR Green qPCR Mix的组分

100 mM KCl

4 mM MgCl₂

400 μM dNTP混合物

0.2 U/μl Taq DNA聚合酶

dd H₂O等

 

应用举例

注：以下反应举例为50 μl标准PCR体系，仅供参考。实际PCR条件应根据模板、引物结构、目的片段大小加以优化，确定最佳反应条件。

 

反应体系

 λ DNA（2.5 ng/μl）                          1 μl

 Primer 1（10 μM ）                          2 μl

 Primer 2（10 μM）                           2 μl

 2×SYBR Green qPCR Mix               25 μl

 dd H₂O                                 补足至50 μl

 

反应条件

94℃    4 min

94℃    30s

X ℃    30s

72℃    40s（获取荧光值）

×32-45个循环

 

东盛SYBR® Green qPCR Mix扩增等倍浓度质粒扩增曲线

东盛SYBR® Green qPCR Mix扩增等倍浓度质粒扩增曲线

 

样本分别是10ng、1ng、0.1ng、0.01ng、0.001ng、0.0001ng/μl浓度的质粒

实验仪器：BIO-RAD CFX96

 

备注：

1  建议在冰上配置PCR 反应液后，再放入实时荧光定量PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性，减少非特异性扩增，得到良好的PCR结果。

2  因本产品含有SYBR^® Green I，使用或保存时避免长时间强光照射。

3  配制反应液的过程中，请用新的枪头、离心管，以免交叉污染。

4  反应体系中引物、模板的用量，请根据实际情况优化。同时，本产品附带的MgCl₂方便调整体系镁离子的浓度。

5  本品与ABI产品的使用程序有一定差异，使用时请重新调整程序，达到良好的特异性及灵敏度。

6  模板DNA推荐用量（50 μl PCR反应体系）

    人类基因组DNA       0.1 μg ---1 μg

    λDNA                 0.5 ng---5 ng

    质粒DNA             0.1 ng-10ng

    大肠杆菌DNA         10 ng-100 ng