yeasenBrand,null 产品货号： 11123ES50Item#, HifairTM Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)<br>英文名称： HifairTM Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)

Hifair^TM Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR

(gDNA digester plus)

产品信息

产品名称	产品编号	规格	储存	价格（元）
Hifair^TM Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)	11123ES50	50 T	-20℃	686.00
Hifair^TM Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)	11123ES70	200 T	-20℃	1926.00

产品描述

Hifair^TM Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)基于Hifair^TM Ⅱ Reverse Transcriptase而开发的即用型预混液。与Hieff^TM M-MLV (H^-) Reverse Transcriptase相比，Hifair^TMⅡ Reverse Transcriptase热稳定性和cDNA合成效率大幅度提高。

该预混液包含gDNA digester和2×Hifair^TM Ⅱ SuperMix plus。gDNA digester可去除RNA模板中残留的基因组DNA污染，保证后续结果更加可靠。2×Hifair^TM Ⅱ SuperMix plus含有逆转录反应所需的所有组分（Buffer，dNTP，Hifair^TMⅡ Reverse Transcriptase，RNase inhibitor，Random primers/ Oligo (dT)₁₈ primer mix），只需加入RNA模板和 RNase-free ddH₂O即可进行逆转录反应，并同时终止gDNA digester的作用，保证cDNA的完整性。

该产品适用于两步法RT-qPCR检测，针对qPCR进行特别优化，比例优化的Random primers/ Oligo (dT)₁₈ primer mix，使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始，并具有相同的逆转录效率，最大程度保证了qPCR结果的真实性和可重复性。逆转录产物兼容SYBR^®Green和探针法qPCR，可以根据实验目的，选择UNICON^TM qPCR SYBR^® Green Master Mix，Hieff^TM qPCR SYBR^® Green Master Mix或Hieff^TM qPCR TaqMan Probe Master Mix等试剂配合使用，进行高性能的基因表达分析。

产品组分

编号	组分	产品编号/规格
编号	组分	11123ES50 (50 T)	11123ES70 (200 T)
11123-A	RNase-free ddH₂O	1 mL	4×1 mL
11123-B	5×gDNA digester Buffer	100 μL	4×100 μL
11123-C	gDNA digester	50 μL	4 ×50 μL
11123-D	2×Hifair^TM Ⅱ SuperMix plus	500 μL	4×500 μL

【注】：2×Hifair^TMⅡ SuperMix plus含有gDNA digester抑制剂。

产品应用

适用于两步法RT-qPCR。

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存。

第一链cDNA合成操作步骤

1. 残留基因组DNA去除

在RNase free离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2 min。

组分	使用量
RNase free ddH₂O	To 10 μL
5×gDNA digester Buffer	2 μL
gDNA digester	1 μL
模板RNA	Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA:1 ng-500 ng

2. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）

在第1步的反应管中直接加入2×Hifair^TM Ⅱ SuperMix plus，用移液器轻轻吹打混匀。

组分	使用量
第1步的反应液	10 μL
2×Hifair^TM Ⅱ SuperMix plus	10 μL

3.逆转录程序设置

标准程序（可获得高质量的cDNA）

温度	时间
25℃	5 min
50℃	30 min
85℃	5 min

或快速程序（适用于大多数RT-qPCR实验）

温度	时间
50℃	15 min
85℃	2 min

【注】：逆转录温度：推荐使用50℃。对于高GC含量模板或者复杂模板，可将逆转录温度提高到55℃。

※ 逆转录产物可立即用于qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。

注意事项

1）gDNA digester和2×Hifair^TM Ⅱ SuperMix plus含有高浓度的甘油，使用前请短暂离心收集到反应管底部，并用移液枪轻轻吸打充分混匀后，准确吸取；

2）如果加入RNA模板体积较大 (如超过2 μL)，请确保RNA是溶于水中而不是TE中，因为TE会对gDNA去除以及逆转录反应产生抑制；

3）可以不经过基因组去除步骤，直接用2×Hifair^TM Ⅱ SuperMix plus进行逆转录，这样所得到的结果会与使用Hifair^TM Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix (Cat No. 11120ES) 效果一致。但是请勿将gDNA digester与11120ES中的2×Hifair^TM Ⅱ SuperMix配套使用，因其不含终止gDNA digester反应的成分，会影响反转录和后续的qPCR实验；

4）反应液的配制应在冰上操作完成，操作过程应避免RNase污染；

5) 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

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