| Can Get Signal Immunoreaction Enhancer Solution 2 英文名称： Can Get Signal Immunoreaction Enhancer Solution 2 |
| 型号:null 产品货号： NKB-301 |
| 价格:请致电：010-57128832,18610462672 |
| 品牌: japan 试剂级别： 试剂级 |
Can Get Signal Immunoreaction Enhancer Solution 2 |
产品信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格（元） |
| HieffTM M-MLV (H-) Reverse Transcriptase逆转录酶 | 11105ES92 | 10000 U | -20℃ | 368.00 |
| HieffTM M-MLV (H-) Reverse Transcriptase逆转录酶 | 11105ES93 | 5×10000 U | -20℃ | 1586.00 |
产品描述
HieffTM M-MLV (H-) Reverse Transcriptase是通过点突变技术得到的RNase H活性缺失的逆转录酶。野生型的M-MLV包含RNase H活性，该活性可催化降解DNA/RNA杂合体中的RNA，因而在cDNA第一条链的合成过程中可能会降解DNA/RNA杂合体中的模板RNA，影响cDNA合成长度和得率。与野生型M-MLV相比，HieffTM M-MLV (H-)的扩增能力增强，可扩增长达10 kb的cDNA。此外，其热稳定性大幅度提高，可耐受高达42℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。
产品组分
| 编号 | 组分 | 产品编号/规格 | |
| 11105ES92 (10000 U) | 11105ES93 (5×10000 U) | ||
| 11105-A | 5×HieffTM M-MLV (H-) Buffer | 250 μL | 5×250 μL |
| 11105-B | HieffTM M-MLV (H-) Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 50 μL | 5×50 μL |
产品应用
全长cDNA文库构建；终点法PCR；实时定量PCR等。
活性定义
以Poly(A) .Oligo(dT)为模板-引物，在37℃，10 min内，将1 nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。
质量控制
核酸外切酶残留检测：200 U本酶和1 μg λDNA-Hind Ⅲ，37℃下孵育1 h，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：200 U本酶和1 μg Supercoiled pBR322 DNA，37℃下孵育1 h，DNA的电泳谱带不发生变化。
RNase残留检测：200 U本酶和1 μg小鼠肝脏总RNA，37℃下孵育1 h，RNA电泳谱带不发生变化。
运输与保存方法
冰袋运输。-20 ℃保存。
注意事项
1）请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用耗材均需保证RNase free，以防止RNase污染；
2）所有操作均应在冰上进行，防止RNA降解；
3）为保证高效率逆转录，建议使用高质量的RNA样本；
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
第一链cDNA合成操作步骤
1. RNA变性（此步为可选步骤，RNA变性有助于打开二级结构，可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。）
| 组分 | 使用量 |
| RNase free ddH2O | to 13 μL |
| Oligo (dT)18 (50 μM) or Random Primers (50 ng/μL) or Gene Specific Primers (2 μM) | 1 μL |
| or 1 μL | |
| or 1 μL | |
| 模板RNA | Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA:1 ng-500 ng |
65℃加热5 min，迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后加入下表中的逆转录反应液，并用移液器轻轻吹打混匀。
2. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）
| 组分 | 使用量 |
| 上一步的反应液 | 13 μL |
| 5×HieffTM M-MLV (H-) Buffer | 4 μL |
| dNTP Mix (10 mM) | 1 μL |
| HieffTM M-MLV (H-) Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 1 μL |
| RNase inhibitor (40 U/µL) | 1 μL |
3. 逆转录程序设置
| 温度 | 时间 |
| 25℃ | 5 min |
| 42℃ | 30-60 min |
| 85℃ | 5 min |
【注】：1）当使用Random Primers时，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略；
2）逆转录温度：推荐使用42℃；
3）85℃加热5 min，目的是使逆转录酶失活。
※ 逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。
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HB170619