中国/美国/欧洲<br>试剂级别：分子生物学级Brand,null 产品货号： HZ140429-10Item#, M15 感受态细胞<br>英文名称： M15 Competent Cell

M15 感受态细胞
英文名称： M15 Competent Cell

型号:null 产品货号： HZ140429-10

价格:请致电：010-57128832,18610462672

品牌: 中国/美国/欧洲
试剂级别：分子生物学级

M15 感受态细胞

本产品是采用大肠杆菌M15菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测，转化效率可达107。本产品抗性为卡那霉素。

其基因型如下：

lac ara gal mtl rec A+ uvr + [pREP4 lac IkanaR]

干冰运输，-80℃保存，有效期6个月。

:7.8000pt;margin-bottom:7.8000pt;mso-para-margin-top:0.5000gd;mso-para-margin-bottom:0.5000gd;">产品信息

产品名称	产品编号	规格	储存	价格（元）
Hifair^TM Ⅲ Reverse Transcriptase 第三代耐热逆转录酶	11111ES92	10000 U	-20℃	1426.00
Hifair^TM Ⅲ Reverse Transcriptase 第三代耐热逆转录酶	11111ES93	5×10000 U	-20℃	4626.00

产品描述

Hifair^TMⅢ Reverse Transcriptase是在Hifair^TMⅡ Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到的新一代逆转录酶，与Hifair^TMⅡ Reverse Transcriptase相比，其热稳定性大幅度提高，可耐受高达55℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，非常适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair^TM Ⅲ Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升，可扩增长达12 kb的cDNA。

产品组分

编号	组分	产品编号/规格
编号	组分	11111ES92 (10000 U)	11111ES93 (5×10000 U)
11111-A	5×Hifair^TM Ⅲ Buffer	250 μL	5×250 μL
11111-B	Hifair^TM Ⅲ Reverse Transcriptase (200 U/μL)	50 μL	5×50 μL

产品应用

全长cDNA文库构建；终点法PCR；实时定量PCR等。

活性定义

以Poly(A) .Oligo(dT)为模板-引物，在37℃，10 min内，将1 nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。

质量控制

核酸外切酶残留检测：200 U本酶和0.6 μg λDNA-Hind Ⅲ在37℃下孵育1 h，DNA的电泳谱带不发生变化。

核酸内切酶残留检测：200 U本酶和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在37℃下孵育1 h，DNA的电泳谱带不发生变化。

RNase残留检测：200 U本酶和1 μg小鼠肝脏总RNA在37℃下孵育1 h，RNA电泳谱带不发生变化。

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存。

注意事项

1）请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用耗材均需保证RNase free，以防止RNase污染；

2）所有操作均应在冰上进行，防止RNA降解；

3）为保证高效率逆转录，建议使用高质量的RNA样本；

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

第一链cDNA合成操作步骤

1. RNA变性（此步为可选步骤，RNA变性有助于打开二级结构，可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。）

组分	使用量
RNase free ddH₂O	to 13 μL
Oligo (dT)₁₈(50 μM) or Random Primers (50 ng/μL) or Gene Specific Primers (2 μM)	1 μL
	or 1 μL
	or 1 μL
模板RNA	Total RNA: 10 pg -5 μg或mRNA:10 pg-500 ng

65℃加热5 min，迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后加入下表中的逆转录反应液，并用移液器轻轻吹打混匀。

2. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）

组分	使用量
上一步的反应液	13 μL
5×Hifair^TM Ⅲ Buffer	4 μL
dNTP Mix (10 mM)	1 μL
Hifair^TM Ⅲ Reverse Transcriptase (200 U/μL)	1 μL
RNase inhibitor (40 U/µL)	1 μL

3. 逆转录程序设置

温度	时间
25℃	5 min
50℃	30-60 min
85℃	5 min

【注】：1）当使用Random Primers时，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)₁₈或Gene Specific Primers，此步可省略；

2）逆转录温度：推荐使用50℃；对于高GC含量模板或者复杂模板，可将逆转录温度提高到55℃；

3）85℃加热5 min，目的是使逆转录酶失活。

※ 逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。

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HB170619