NEW TSAP Thermosensitive Alkaline Phosphatase

TSAP Thermosensitive Alkaline Phosphatase(TSAP热敏感­碱性***酸酶)可以催化DNA的5`-末端去***酸基团，阻止线性化的克隆­载体DNA在连接反应中重新环化及再连接；对于3`突出端、5`突出­端及平末端都具有活性。也可通过5`末端***酸基团的脱***酸来制备­5`末端标记DNA。­      

TSAP在74℃加热15分钟会完全不可逆失活。因此在该酶处理后­DNA无需进行纯化步骤就可以进行连接反应。在下面所列的条件下­TSAP在Promega所有的限制性酶反应缓冲液中都保持完整的活性，­使得酶切、去***酸化及连接反应可以简单有效的完成。

注意：一个单位TSAP与10个单位的shrimp alkaline phosphatase(SAP)­的活力相当。

特点­ 

•  易操作：TSAP在Promega所有的限制性酶切缓冲液中都有活性，可以省掉纯化步骤或者不需更换缓冲液。­ 

•  方便：当74℃加热15分钟后，TSAP完全不可逆失活，这使得碱性***酸酶处理后无需纯化即可进行下游操作，如内切酶消化、脱***酸及连接操作。­ 

•  蓝/白克隆验证： Promega的蓝/白克隆检测为用于克隆的酶提供了高水平的质量控制。­ 

•  提供MULTI-CORETM反应缓冲液。

用途­ 

•  消除5`末端的***酸基团阻止线性化克隆载体DNA的重新连接(1)。­ 

•  使用T4 Polynucleotide Kinase (T4多聚核苷酸激酶)进行末端标记前去除***酸基团(1)。

操作手册   Promega Product Information   9PIM991

储存条件：储存于-20℃。注意标注的有效期。

储存缓冲液：10mM Tris-HCl (pH 7.5,25℃)，100mM NaCl和50%­(v/v)甘油。

单位定义：一个MBU定义为：在37℃，50ul任何Promega限制性酶­反应缓冲液中(Buffer F除外),15分钟内催化1ug线性化的pGEM®­DNA３`突出端去***酸化所需要的酶量。去***酸化反应主要用于阻止­>95%的质粒自连(通过琼脂糖凝胶电泳分析)。

质量控制测试： 活性，SDS-PAGE/纯度，核酸内切酶，DNase，­RNase，蓝/白克隆检测。

来源:细菌。

参考文献­1. Sambrook, J. et al. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold­Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York.

技术资料   Promega Notes PN095

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碱性***酸酶的比较。

                                                          TSAP           SAP                CIAP

热失活                                                 是                 是                     否­                              失活温度                                            74                 65                   N/A

­孵育时间                                           15min         15min             2X30min­

特殊缓冲液(要求/推荐)                     否                  是                    是

­所有的Promega限制性内切酶

缓­冲液中的活性                                  是                 部分                  否

­在不同的反应缓冲液中要求的单位数 1-2               10                   N/A­

蓝/白克隆验证                                    是                   是                     是­­

所有的Promega碱性***酸酶都经过了蓝/白克隆验证。TSAP和SAP可以热失活，增­加了使用的方便性。只有TASP不要求特殊的反应缓冲液，在所在的Promega限制­性内切酶反应缓冲液中都有活性，从而是最方便、最省力的一种选择。­*SPA=虾碱性***酸酶；CIAP=小牛肠碱性***酸酶