重组烟草蚀纹病毒蛋白酶 英文名称: rTEVProtease | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
型号:null 产品货号: 20403ES80 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
价格:请致电:010-57128832,18610462672 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
品牌: yeasen | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
rTEVProtease重组烟草蚀纹病毒蛋白酶 产品信息
产品描述 重组型TEV蛋白酶(rTEV)是经过基因工程改造和纯化后的重组蛋白酶,不仅保持天然TEV酶的功能活性,且在广谱的温度范围内表现出更好的稳定性和特异性。rTEV是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶,具有很强的位点特异性,严格识别七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S),切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸/丝氨酸之间。普遍应用的七氨基酸序列为:Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly。rTEV在pH 7.0,30°C时可达到最佳活性,但在pH 6.0-8.5和温度4-30°C的广泛范围内皆有活性(见表1),使得反应条件的选择可根据目的蛋白的情况而灵活变动。另外rTEV切割后也能利用其N端的 6×His标签,通过Ni-NTA树脂去除,以达到纯化目的蛋白的目的。 表1. 不同温度下rTEV酶切活性
影响天然TEV酶活性的常见因素:1)PMSF和AEBSF(1mM),TLCK(1mM),Bestatin(1 mg/ml)、Pestatin A(1mM),EDTA(1mM)以及E-64(3 mg/ml),以上这些蛋白酶抑制剂对rTEV的活性没有影响;2)Zn离子(>5 mM)对rTEV活性有抑制;3)与半胱氨酸反应的试剂也是rTEV的潜在抑制剂。 产品性质
产品组分
运输与保存方法 冰袋(wet ice)运输。 收到产品后,请将rTEV Buffer 1、rTEV Buffer 2置于-20 ºC保存,一年稳定。对于rTEV Protease,短期使用,可置于-20 ºC保存,6个月稳定;长期使用,请置于-70℃保存,一年稳定。强烈建议收到货或者第一次使用时将各组分分装保存,特别是rTEV Protease,以及rTEV Buffer 2(1000×),避免反复冻融。 应用实例 1. 在EP管中配制如下反应体系,
【*】:取适量的rTEV Buffer 2(1000×)做10倍稀释到rTEV Buffer 2(100×),再根据以上体系加量。 2. 30℃孵育,在1、2、4、6小时分别吸出30 μl上述反应液,置于单独的EP管中。 3. 向上述EP管中加入30 μl 2×SDS Loading Buffer,置于-20℃。 4. 样品全部反应完毕后,样品煮沸5 min,取40 μl进行SDS-PAGE分析。确定最佳反应时间。如融合蛋白要求低温处理,可将反应液置于4℃,请延长反应时间,并增加rTEV酶用量。 注意事项 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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