蔗糖***酸合成酶（Sucrose phosphate synthase，SPS）试剂盒说明书

产品简介：

蔗糖不仅是重要的光合产物，也是植物体内运输的主要物质，还是碳水化合物的贮存形式之一。蔗糖***酸合成酶（SPS）以果糖-6-***酸为受体，形成的蔗糖***酸在蔗糖***酸酶的作用下形成蔗糖。一般把蔗糖***合成酶-蔗糖***酸酶系统看作是蔗糖合成的主要途径。蔗糖***酸合成酶催化果糖-6-***酸形成蔗糖***酸，蔗糖***酸与间***二酚反应可呈现颜色变化，在480nm下有特征吸收峰，酶活力大小与颜色的深浅成正比。

试验中所需的仪器和试剂：

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL比色皿、研钵、冰、蒸馏水

产品内容：

提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；

试剂一：液体10mL×1瓶，-20℃保存；

试剂二：1mg/mL蔗糖溶液10mL×1瓶，4℃保存；

试剂三：液体5mL×1瓶，4℃保存；

试剂四：液体40mL×1瓶，4℃保存；

试剂五：液体10mL×1瓶，4℃保存；

操作步骤：

一、测定样品提取：

称取约0.1g组织加入1mL提取液，冰浴中匀浆。8000g ，4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

二、测定操作表：

按下表操作：

测定管

标准管

试剂一（μL）150 150

样本 （μL）

30

/

试剂二（μL）

/

30

混匀，25℃水浴10min

试剂三（μL）

50

50

沸水浴中煮沸10min，冷却

试剂四（μL）

700

700

试剂五（μL）

200

200

混匀，80℃水浴保温10min，冷却后，以蒸馏水调零，480nm下测定各管OD值。

SPS活力单位的计算：

方法（一）按照蛋白浓度计算

单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1μg 蔗糖***酸定义为一个酶活力单位。

SPS活性（U/mg 蛋白）=测定管吸光度÷标准管吸光度×1mg/mL÷蛋白浓度(mg/mL) ×1000

方法（二）按照样本鲜重计算

单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1μg 蔗糖***酸定义为一个酶活力单位。

SPS活性（U/mg 鲜重）=测定管吸光度÷标准管吸光度×1mg/mL÷样本鲜重(g/mL) ×1000

注意事项：

1﹑此试剂盒仅适用于植物组织。

2﹑以上两种计算方法选择其一即可，若用方法（一），需要另外测定蛋白浓度。

 

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