| Rsa I 英文名称： Rsa I |
| 型号:null 产品货号： RSA-101 |
| 价格:请致电：010-57128832,18610462672 |
| 品牌: japan 试剂级别： 试剂级 |
Rsa I |
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价格（元）
T4 DNA Ligase
10301ES40
40000U(40KU)
-20℃
446.00
产品描述
T4 DNA Ligase在ATP做辅酶的情况下可催化dsDNA 平末端或粘性末端相邻核酸的5’***酸末端和3’羟基末端形成***酸二酯键，还可催化RNA和双链中的ssDNA 或RNA 链连接，但不能催化全单链核苷酸间的连接。
本品主要适用于标记RNA 3’-末端，环化RNA和DNA寡聚核苷酸以及克隆cDNA等核酸操作。
产品组分
| 组分编号 | 组分名称 | 规格 |
| 10301-A | T4 DNA Ligase(400U/µl) | 100µl |
| 10301-B | 10×Ligase Buffer | 1ml |
运输和保存方法
冰袋运输。-20℃保存。
单位定义
在20 μl的连接反应体系中，6 μg的λDNA-HindⅢ分解物在16℃下反应30min时，催化50%以上的DNA片段发生连接所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。
质粒控制
核酸外切酶残留检测：2000 U的本品和0.6 μg λ-Hind III在74℃下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：2000 U的本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74℃下反应1小时，DNA电泳谱带不发生变化。
注意事项
1）Buffer在融解时，如果出现少量沉淀属正常现象，请颠倒混匀后使用。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
1. 在无菌微量离心管中配制以下反应体系：
| 10×Ligase Buffer | 1µl |
| 插入片段* | 0.3pmol |
| 载体DNA* | 0.03pmol |
| T4 DNA Ligase (400U/µl) | 1µl |
| ddH2O | To 10µl |
【*注1】：插入片段与载体的摩尔比应在3:1-10:1之间。
【*注2】：平末端载体与DNA片段进行连接时，应首先将载体进行去***酸化处理，以防发生自连接现象。
2. 16℃反应过夜；
3. 转化
1）将连接产物加入到100µl 感受态细胞中（连接产物不应超过感受态细胞的1/6），轻弹混匀，冰上孵育30min。
2）将离心管于42℃，热激90s（不要晃动），之后立刻置于冰水浴静置2-3min。
3）向离心管中加入900µl LB或SOC培养基，37℃，150rpm，振荡培养45min，该过程使菌体复苏，抗性基因表达。
4）2500g 离心5min，吸去900µl上清，用剩余培养基重悬菌体，用无菌涂布棒将剩余菌体在正确抗性的平板上涂布均匀，待菌液被平板吸收后，37℃倒置培养过夜。
【注】：如果使用超级感受态细胞（转化效率＞108cfu/µg），可直接吸取100-200µl 37℃孵育后的菌液涂板，剩余菌液可在4℃保存，1周内都可重新涂板。
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