japan<br>试剂级别：试剂级Brand,null 产品货号： RSA-101Item#, Rsa I<br>英文名称： Rsa I

Rsa I
英文名称： Rsa I

型号:null 产品货号： RSA-101

价格:请致电：010-57128832,18610462672

品牌: japan
试剂级别：试剂级

Rsa I

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单位定义：在2ul连接反应体系、0.12uM（300ug/ml）的5’-末端浓度条件下，16℃反应30分钟，能使50﹪Hind III消化的λDN**段连接上所需的酶量定义为一个活性单位。

使用方法： 1、按下面配制反应体系 2×Quick Ligation Buffer 10ul 载体 50ng 插入片段 50-150ng T4 DNA Ligase 1ul dd H2O up to 20ul 2、室温下反应5分钟，反应产物冰上冷却，然后直接用于转化或冻存于-20℃。注意不要热失活，热失活会急剧降低转化效率。当插入片段超过1.5kb时，延长反应时间至15-30分钟。注意事项： 1 、2×Quick Ligation Buffer用前应彻底混匀，避免反复冻融，可适当分装成小份以保证质量。 2、为保证有效连接，总的载体DNA与插入片段的总浓度应在1-10ug之间。对单插入来说，插入片段:载体比例在1:2-1:6之间最好，低于2:1会降低连接效率，高于6:1会产生重复插入。 3、如果是做电转化，请将连接产物纯化后再进行电转化。

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价格（元）

T4 DNA Ligase

10301ES40

40000U(40KU)

-20℃

446.00

产品描述

T4 DNA Ligase在ATP做辅酶的情况下可催化dsDNA 平末端或粘性末端相邻核酸的5’***酸末端和3’羟基末端形成***酸二酯键，还可催化RNA和双链中的ssDNA 或RNA 链连接，但不能催化全单链核苷酸间的连接。

本品主要适用于标记RNA 3’-末端，环化RNA和DNA寡聚核苷酸以及克隆cDNA等核酸操作。

产品组分

组分编号	组分名称	规格
10301-A	T4 DNA Ligase(400U/µl)	100µl
10301-B	10×Ligase Buffer	1ml

运输和保存方法

冰袋运输。-20℃保存。

单位定义

在20 μl的连接反应体系中，6 μg的λDNA-HindⅢ分解物在16℃下反应30min时，催化50%以上的DNA片段发生连接所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。

质粒控制

核酸外切酶残留检测：2000 U的本品和0.6 μg λ-Hind III在74℃下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。

核酸内切酶残留检测：2000 U的本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74℃下反应1小时，DNA电泳谱带不发生变化。

注意事项

1）Buffer在融解时，如果出现少量沉淀属正常现象，请颠倒混匀后使用。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 在无菌微量离心管中配制以下反应体系：

10×Ligase Buffer	1µl
插入片段*	0.3pmol
载体DNA*	0.03pmol
T4 DNA Ligase (400U/µl)	1µl
ddH₂O	To 10µl

【*注1】：插入片段与载体的摩尔比应在3:1-10:1之间。

【*注2】：平末端载体与DNA片段进行连接时，应首先将载体进行去***酸化处理，以防发生自连接现象。

2. 16℃反应过夜；

3. 转化

1）将连接产物加入到100µl 感受态细胞中（连接产物不应超过感受态细胞的1/6），轻弹混匀，冰上孵育30min。

2）将离心管于42℃，热激90s（不要晃动），之后立刻置于冰水浴静置2-3min。

3）向离心管中加入900µl LB或SOC培养基，37℃，150rpm，振荡培养45min，该过程使菌体复苏，抗性基因表达。

4）2500g 离心5min，吸去900µl上清，用剩余培养基重悬菌体，用无菌涂布棒将剩余菌体在正确抗性的平板上涂布均匀，待菌液被平板吸收后，37℃倒置培养过夜。

【注】：如果使用超级感受态细胞（转化效率＞10⁸cfu/µg），可直接吸取100-200µl 37℃孵育后的菌液涂板，剩余菌液可在4℃保存，1周内都可重新涂板。

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