T4 RNA Ligase

T4 RNA Ligase(T4 RNA连接酶)催化依赖于ATP的连接反应，­将单链RNA或DNA与5`-***酸末端的单链RNA或DNA相连(1,2)。该酶­从重组E. coli CA4 (RNase I-缺失)中纯化而来，分子量为43.5kDa。­T4 RNA Ligase也可催化在单链RNA分子上添加[5`-32P]核苷酸和3`,­5`-双***酸的反应。

特点­ 

•  高温失活：T4 RNA Ligase在 65℃加热15分钟失活。­ 

•  提供10×反应缓冲液：500mM Tris-HCl (pH 7.8，25℃)，100mM MgCl2，50mM DTT，10mM ATP 。

用途­ 

•  连接单链核酸(3)。­ 

•  RNA的3`末端标记(3)。­ 

•  环化RNA及DNA寡核苷酸(4)。­ 

•  克隆全长cDNA(5)。

操作手册  Promega Product Information 9PIM105

储存条件：储存于-20℃。

储存缓冲液：10mM Tris (pH 7.5,25℃)，50mM KCl，0.1mM EDTA，­1mM DTT，50%甘油, 0.1% Tween® 20。

单位定义：一个单位定义为：在37℃, 30分钟内催化1nmol的[5`-­32P]rA14-20转化为抗***酸酶的形式所需要的酶量，总反应体积为30ml。­反应条件：50mM Tris-HCl (pH 7.8,25℃)，10mM MgCl2，5mM­DTT，1mM ATP和10mM [5`-32P]rA14-20。

质量控制测试：活性，SDS-PAGE/纯度，DNase，RNase，核酸内­切酶。

来源：重组E. coli菌株。

参考文献­1. Silber, R. et al. (1972) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 69, 3009–13.­2. England, T. et al. (1977) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74, 4839–42.­3. Uhlenbeck, O.C. and Gumport, R.I. (1982) The Enzymes 158, 31.­4. Brennan, C.A. et al. (1983) Meth. Enzymol. 100, 38–52.­5. Schaefer, B.C. (1995) Anal. Biochem. 227, 255–73.

技术资料 Promega Notes     PN065

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