1-5ug 总RNA 或50-500ng mRNA

2ul Oligo(dT)16 或2 pmole 基因特异性引物

补RNase-free ddH2O 至14.5ul

2、70℃保温5min 后迅速在冰上冷却2min，简短离心收集反应液后加入以下各组分：

4ul 5×M-MLV Buffer

1ul dNTPs

0.5ul RNasin

1ul M-MLV

3、42℃温浴60min，如果是用随机引物，请先将离心管置25℃温浴10min，再42℃温浴60min。

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5、用RNase-free ddH2O 将反应体系稀释到50ul，取2-5ul 进行PCR 反应。

二、PCR反应

1、按以下各组分配制50ul PCR 反应体系：

10×PCR Buffer 5ul

dNTPs 1ul

上游引物（用户自备10um） 1ul

下游引物（用户自备10um） 1ul

RT 反应产物 2ul

Taq Polymerase 0.5ul

ddH2O x ul

Total Volume 50ul

2、混匀后短暂离心，PCR 仪扩增，琼脂糖凝胶电泳观察结果。

注意事项：

1、 用于cDNA 合成反应的相关试剂和耗材尽可能用DEPC 进行处理，并在高压灭菌后使用。有些试剂不

能高压灭菌时，首先用经过灭菌的器具、水等配制溶液后，再将溶液进行过滤除菌处理。

2、 试剂盒的各组分应在-20℃保存，避免反复冻融，有效期12 个月。

3、 RNA 样品要避免反复多次冻融，应使RNA 在冰浴中处于融化状态。

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