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产品名称：FlashPfu DNA 聚合酶

英文名称：FlashPfu DNA Polymerase

产品规格：

产品编号	产品规格	产品价格
TK01123	250U/管	￥700
TK01125	500U/管	￥1200

产品描述：同科FlashPfu 高保真DNA 聚合酶通过融合特殊持进能力增强因子与精心改造过的pfu DNA聚合酶，是来源于超嗜热古细菌的DNA聚合酶。该酶具有5→3 聚合酶活力, 3→5 核酸外切酶活力，并产生平头末端产物。由于其具有高效的3→5 核酸外切酶活力（校正活力），使得PCR能获得很好的保真性，FlashPfu DNA聚合酶的错配率约为Taq DNA聚合酶的1/50。FlashPfu DNA聚合酶的最快延伸速率可达5−6 kb/min，对于复杂模板也可达到2 kb/min。

特点与应用：

1、高保真PCR——保真性为Taq DNA聚合酶的50倍

2、快速PCR——延伸速度15−30 s/kb

3、长片段PCR——基因组DNA ≤ 19 kb，λ DNA ≤ 30kb

4、生成用于平头末端克隆的PCR产物

5、定点突变

活力单位定义：75°C、30分钟内使10 nmol的dNTP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量，定义为1个活性单位（U）。

储存条件：储存于-20℃。

注意事项：

1、请等2× FlashPfu PCR Buffer (with Mg2+)完全溶解后再配制PCR反应体系。

2、为了获得的扩增效果，扩增前的所有操作请在冰上进行。在室温下，聚合酶活力可能会产生非特异性扩增。并且请将FlashPfu DNA Polymerase最后加入反应体系，以避免酶的3’→5’核酸外切酶活力导致引物降解。

3、本产品扩增产物的克隆请按照平头末端克隆方法操作。

4、引物设计：

1）引物Tm值计算请使用最邻近法。请不要使用其他计算方法，它们计算得到的Tm值偏低，不适合本产品。

2）引物长度控制在20−35碱基，并且Tm > 60°C。

3）引物的GC含量尽量控制在40−60%。

4）在引物3’端以G或C结尾，可提高引物和模板结合效率。但是要避免3’端避免有多个G或C，防止非特异性结合。

5）正、反引物的Tm之差不要大于5°C。

6）正、反向引物的3’端避免相互互补。

7）扩增长片段时，引物长度控制在25−35碱基。

8）进行定点突变时，请将错配碱基靠近5’端。若错配碱基靠近3’端，可能会受本酶校正。

不要使用含有尿嘧***和次黄嘌呤核苷的引物。

应用举例：对于复杂模板的极限延伸速度

步骤1. 按下表所示，在50 μl PCR体系中加入100  ng人基因组：

成分	体积	终浓度
2× FlashPfu PCR Buffer (with Mg2+)	25 μl	1×
2.5 mM dNTP	4 μl	0.2 mM each
10 μM Forward Primer	2.5	0.5 μM
10 μM Reverse Primer	2.5	0.5 μM
FlashPfu DNA Polymerase	1.0 μl	1 U
Nuclease-free water	To 50 μl
100 ng/μl human genomic DNA	1 μl	100 ng/50 μl

步骤2. 设置PCR程序：

2步法
步骤	温度	时间	循环
预变性	98°C	3 min	1
变性	98°C	10 sec	30
延伸	72°C	X min

延伸时间:

X= 1 min (10 s/kb)

1.5 min (15 s/kb)

2 min (20 s/kb)

3 min (30 s/kb)

该案例中所用的引物：

6 kb β-globin target

FP: ACAAGGGCTACTGGTTGCCGATTTTTATTG

RP: GGGACTGGCCTCAGAGGAAACTTCAGG

案例结果电泳图：

同科生物简介：成立于2007年，是一家集研发、生产、销售和技术服务于一体专注于生命医学和生物技术领域的高科技企业。主营业务有科研产品、诊断试剂、分子诊断和技术服务等，主要服务于科研机构、大专院校、医院和工业等客户。

生产科研：同科生物www.toneker.com搭建多个研发与合作技术平台（博士后实践基地、院士工作站、同济大学人才培养与产学研合作基地及生物研究中心等），为技术创新提供了坚实的基础保障。拥有三类体外试剂生产中心、仪器生产中心、研发质检实验室等、厂房和实验面积达8000多平米，仪器设备设施先进齐全（包括定量PCR仪、生物安全柜、核酸蛋白测定仪、高压细胞破碎仪、FPLC等系列高端精密仪器设备）。