中国/美国<br>试剂级别：分子生物学级Brand,null 产品货号： 11105YB90Item#, M-MLV (H-) Reverse Transcriptase 逆转录酶<br>英文名称： M-MLV (H-) Reverse Transcriptase 逆转录酶

M-MLV (H-) Reverse Transcriptase 逆转录酶

产品信息

产品名称	产品编号	浓度	规格	储存	价格（元）
M-MLV (H^-) Reverse Transcriptase逆转录酶	11105YB90	200U/μl	5000U	-20 ºC
M-MLV (H^-) Reverse Transcriptase逆转录酶	11105YB92	200U/μl	10000U	-20 ºC

M-MLV (H-) Reverse Transcriptase 逆转录酶产品描述

野生型的M-MuLV包含RNase H活性，该活性可催化降解DNA/RNA杂合体中的RNA，因而在cDNA 第一条链的合成过程中可能会降解RNA/DNA杂合体中的模板RNA，本品为通过基因重组技术得到的点突变型RNase H活性缺失的逆转录酶，即M-MLV (H^-) Reverse Transcriptase，与M-MuLV相比，不仅改善了模板RNA可能被降解情况，且具有更强的延伸能力和稳定性，可用于较长的cDNA合成以及高比例的全长cDNA文库的构建。

本品适用于第一链cDNA合成，cDNA 片段长度最高可达12kb。也可用于低拷贝基因的检测。

产品组分

编号	组分	产品编号及规格
编号	组分	1110590 (5,000U)	1110592 (10,000U)
11105-A	5×Reaction Buffer	250 μl	500 μl
11105-B	M-MLV (H^-) Reverse Transcriptase (200 U/μl)	25 μl	50 μl

M-MLV (H-) Reverse Transcriptase 逆转录酶运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。收到产品后放到-20 ºC保存。

M-MLV (H-) Reverse Transcriptase 逆转录酶注意事项

1）为保证反转录成功，建议使用高质量的RNA样品。

2）请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用的离心管、枪头等耗材均需保证RNase free，以防止RNase污染。

3）如果RNA模板GC含量丰富或者具有复杂的二级结构，可以先只加RNA模板、引物和RNase free H₂O混匀，65℃变性5min，冰上冷却，短暂离心后加入其他成分继续下面的反转录步骤。

4）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

使用方法

1第一条链cDNA合成（以20μl反应体系为例）

1.1 按照表【1】配制反应体系

表1 cDNA第一条链合成反应体系表

RNase free ddH₂O	to 20 μl
5×Reaction Buffer	4 μl
dNTP Mixture (10 mM each)	1 μl
Oligo(dT)₁₈(0.5μg/μl) or Random hexamer (0.1μg/μl) or GSP(Gene Speicific Primer)(2 μM)	1 μl
RNase inhibitor (40 U/μl)	0.5 μl
M-MLV (H^-) Reverse Transcriptase	1 μl
模板RNA	Total RNA: 50ng-5μg mRNA: 5-500ng

1.2 轻轻混匀

若使用Oligo(dT)₁₈或基因特异性引物，42℃孵育50min。

若使用Random hexamer，25℃孵育10min，42℃孵育50min。

1.3 65℃加热15min失活M-MLV (H^-) Reverse Transcriptase。

2 RT-PCR

建议取1/10～1/5体积（2～4µl）的反转录产物作为PCR模板。

2.1 按照【表2】配制反应体系表

表2 RT-PCR反应体系表

组分	体积	终浓度
cDNA 模板	2μl	依需要调整
Forward Primer (10μM)	1μl	0.2 μM each
Reverse Primer (10μM)	1μl	0.2 μM each
10×Taq Buffer(含Mg²⁺)	5 μl	1×
2.5mM dNTPs	4μl	0.2 mM
Taq DNA Polymerase	0.5μl	2.5units
ddH₂O to final volume	50μl	/

2.2 按下列条件进行PCR反应：