HieffTM First Strand cDNA Synthesis Super Mix for RT-qPCR(+gDNA wiper)产品描述

Hieff^TM First Strand cDNA Synthesis Super Mix for RT-qPCR (+gDNA wiper)基于Hieff^TM Reverse Transcriptase （Cat No. 11101ES84），该酶是在M-MLV (RNase H-) Reverse Transcriptase基础上经过多点突变得到的全新逆转录酶，热稳定性提高，在50℃下活性最高，且可耐受高达55℃的反应温度，适用于具有二级结构的RNA模板的逆转录，能稳定可靠地合成cDNA。

RNA模板首先用4 × gDNA wiper Mix短暂处理，可彻底去除残留的基因组DNA污染，保证后续的定量结果更加可靠，并且可简化qPCR引物设计，无需跨外显子/内含子仔细设计；随后直接加入5 × Super Mix II，即可立即进行逆转录。

5 × Super Mix II中含有逆转录反应所需的所有组分 (Buffer、dNTP、Hieff^TM Reverse Transcriptase、RNase inhibitor、Random primers/Oligo dT primer mix) ，并可同时终止4 × gDNA wiper Mix，保证cDNA的完整性。RNA模板的体积最多可加到总体积的60%，非常适合于低浓度RNA模板的逆转录反应。4 × gDNA wiper Mix和5 × Super Mix II在-20℃不会冻结，使用方便。

该产品适用于两步法RT-qPCR检测，针对qPCR进行特别优化，比例优化的Random primers/Oligo dT primer mix，使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始，最大程度保证了qPCR结果的可重复性。逆转录产物兼容SYBR®Green和探针法qPCR，可以根据实验目的，选择Hieff^TM qPCR SYBR® Green Master Mix (Cat No. 11201ES03/11202ES03/11203ES03)或Hieff^TM qPCR TaqMan Probe Master Mix (Cat No. 11204ES03)等试剂配合使用，进行高性能的基因表达分析。

  HieffTM First Strand cDNA Synthesis Super Mix for RT-qPCR(+gDNA wiper)产品组分

a 包含Buffer、dNTP、Hieff^TM Reverse Transcriptase、RNase inhibitor、Random primers/Oligo dT primer mix。

注：与Hieff^TM First Strand cDNA Synthesis Super Mix for RT-qPCR(Cat No. 11103ES70)中的5 ×Super Mix成分不同，不可以混用。

b 除不含Hieff^TM Reverse Transcriptase外，其余成分与5 ×Super Mix II相同，用于配制对照反应。      

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。产品在-20 ºC保存。

质量控制

所有组分经检测均无核酸外切酶，核酸内切酶，RNase残留。

功能检测：以1 pg-1 μg HeLa cell total RNA为模板，测试qRT-PCR性能。以6个数量级的模板量的对数值对Ct值做标准曲线，R²>0.990，斜率在-3.20到-3.60之间；在1 μg HeLa cell total RNA中混入100 ng human genomic DNA，经gDNA wiper Mix处理后，进行qRT-PCR，对照反应的Ct值>40。

客户需要准备的材料

RNase free的1.5 ml微量离心管或0.2ml PCR管

水浴锅或PCR仪

冰

RNA（高质量的完整的RNA对于获得高质量的cDNA是至关重要的）

  HieffTM First Strand cDNA Synthesis Super Mix for RT-qPCR(+gDNA wiper)操作步骤

1.基因组DNA去除

在RNase free离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2 min。

2.配制逆转录反应体系

在第1步的反应管中直接加入5 ×Super Mix II，用移液器轻轻吹打混匀。

3.对照反应（可选）

对照反应是指不加逆转录酶的逆转录阴性对照反应，用于检验RNA模板中是否有基因组DNA残留。在RNase free离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。

4.按下列条件进行第一链合成反应：

标准程序（可获得高质量的cDNA）

或快速程序（适用于大多数RT-qPCR实验，效果与标准程序相当）

5.cDNA产物可在-20℃储存或立即用于qPCR反应。

第一链cDNA产物可直接用作qPCR反应的模板。建议作为模板的cDNA产物的体积不超过qPCR反应体积的1/10。

可选择选择Hieff^TM qPCR SYBR® Green Master Mix (Cat No. 11201ES03/ 11202ES03/ 11203ES03) 或Hieff^TM qPCR TaqMan Probe Master Mix (Cat No. 11204ES03)作为qPCR试剂。