1、用pLVX-AmCyan1-N1先做一下转化，把质粒转入感受态细胞内

2、将菌液涂到LB平板上倒置、过夜培养

3、挑取单克隆菌落，打入5毫升左右的液体LB，摇床12-16小时，吸取两毫升左右菌液，做一个小提，测浓度，跑胶，4、确定提出来之后，再用剩余菌液按1:100比例加入液体LB，摇床12-16小时

5、摇床结束后，用去内毒素的中提或者大提，可以留几毫升菌液加入适量甘油制成甘油菌冻-80，提出来的pLVX-AmCyan1-N1就可以用于转染了。

如果想直接用甘油菌，那么只需要做第四第五步就行。

以Invitrogen的Lipofectamine 2000为例，需要注意以下几点：

1、DNA的量：Lipofectamine 2000=1：2~3

2、细胞密度大约占培养板的80%左右，转染。

3、转染期间不要加抗生素，否则会导致细胞死亡。

pLVX-AmCyan1-N1步骤如下：以24孔培养板为例：

1、转染前一天细胞换新的培养基

2、制备DNA-Lipofectamine 2000复合物，如下:

a、用50ul无血清培养基稀释DNA（0.8g），轻轻混匀；

b、Lipofectamine 2000使用前，轻轻混匀，用48ul无血清培养基稀释2ul Lipofectamine 2000，轻轻混匀，室温孵育5分钟；

c、将a+b的液体加在一起，pLVX-AmCyan1-N1轻轻混匀，室温孵育20分钟，使DNA-Lipofectamine 2000复合物形成；

3、将100ul DNA-Lipofectamine 2000复合物加入培养板中，轻轻前后摇匀；

4、放入37度孵箱中培养24~48h后，1：10传代，加入G418筛选。加入G418的量最好设几个梯度或者转染前做MTT，找好G418对你所转细胞致死量的浓度。

5、等细胞在G418作用下，长满后冻存几支（保种）。再克隆化培养：将细胞消化后计数50个细胞，加入22ml完全培养基中，混匀，分装在96孔板中（200ul/孔）。第二天在显微镜下，pLVX-AmCyan1-N1寻找孔中有单个细胞的孔并做标记，等做标记的孔长满后，消化、转移到4孔或6孔培养板中，最后转移到培养瓶中培养，冻存，鉴定。

6、鉴定成功后，建议马上做后续实验，因为在培养过程或冻存中，转进去的基因容易从细胞中掉下来。XY061 肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY062 肠致病性大肠杆菌(EPEC)核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY063 肠集聚性大肠杆菌(EAEC)核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY064 幽门螺旋杆菌(HP)核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY065 坂崎肠杆菌核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY066 沙门菌/志贺菌核酸双色荧光PCR检测试剂盒 48

XY067 副溶血性弧菌/霍乱弧菌核酸双色荧光PCR检测试剂盒 48

XY068 嗜水气单胞菌/类致贺邻单胞菌核酸双色荧光PCR检测试剂盒 48

XY069 小肠结肠炎耶尔森菌/弯曲菌核酸双色荧光PCR检测试剂盒 48

XY070 空肠弯曲菌/结肠弯曲菌核酸双色荧光PCR检测试剂盒 48

XY071 副溶血性弧菌TDH/TLH核酸双色荧光PCR检测试剂盒 48

XY072 副溶血性弧菌TOXR/TRH核酸双色荧光PCR检测试剂盒 48

XY073 霍乱弧菌O139/O1核酸双色荧光PCR检测试剂盒 48

XY074 肠出血型大肠杆菌EHEC O157/H7核酸双色荧光PCR检测试剂盒 48

XY075 肠出血型大肠杆菌EHEC O104/H4核酸双色荧光PCR检测试剂盒 48

XY076 大肠杆菌O104/O157核酸双色荧光PCR检测试剂盒 48

XY077 大肠杆菌致贺毒素(Stx1)/(Stx2)核酸双色荧光PCR检测试剂盒 48

XY078 大肠杆菌致贺毒素黏附抹平因子(Eae)/溶血素(Hly)核酸双色荧光PCR检测试剂盒 48

XY079 霍乱弧菌霍乱毒素基因(ctxA)/毒素共调菌毛亚单位基因(tcpA)核酸双色荧光PCR检测试剂盒 48

XY080 副溶血性弧菌 TDH/TLH/TOXR/TRH核酸四重荧光PCR检测试剂盒 48

XY005 肠道病毒通用(EV-U)核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY006 手足口病肠道病毒(EV71)核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY007 手足口病科萨奇A16病毒(CoxA16)核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY008 乙脑病毒核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY009 腮腺炎病毒核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY010 单纯疱疹病毒核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY011 巨细胞病毒核酸荧光PCR检测试剂盒 48