产品简介：

NADP+和NADPH 含量测定可以计算NADP（NADPH + NADP+)含量和NADPH/NADP+比值，其变化

与***酸戊糖途径和生物合成以及抗氧化反应密切相关。NADPH/NADP+比值不仅是细胞氧化还原态的主要标

志之一，而且在PPP 途径、生物合成和抗氧化代谢中具有重要调控作用。

分别用酸性和碱性提取液提取样品中NADP+和NADPH。NADPH 通过PMS 的递氢作用，使氧化型噻

唑蓝（MTT）还原为甲瓒，570nm 下检测吸光值，从而测定NADPH 含量。利用6-***酸葡萄糖脱氢酶还原

NADP+为NADPH，从而检测NADP+含量。

试验中所需的仪器和试剂：

可见分光光度计或酶标仪、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿或酶标板、研钵、冰和蒸馏

水。

产品内容：

酸性提取液：50mL×1 瓶，4℃保存；

碱性提取液：50mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：基质缓冲液15 mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1 支，-20 ℃保存，用时加入4mL 双蒸水，混匀；

试剂三：粉剂×1 支，-20℃保存，用时加入4mL 双蒸水，混匀；

试剂四：粉剂×1 支，4 ℃保存，用时加入4mL 双蒸水，混匀；

试剂五：液体1.8mL×1 支，4 ℃保存；

试剂六：液体30mL×1 瓶，4 ℃保存；

试剂七：液体50mL×1 瓶，4 ℃保存。

操作步骤：

一、NADP和NADPH的提取：

1、血清（浆）中NADP 和NADPH 的提取：

取0.1mL 血清（浆），加入0.9mL 酸性提取液，煮沸5min；冰浴中冷却后，10000g 4℃离心10min；

取上清液至另一新的离心管中，加入等体积的碱性提取液使之中和；10000g 4℃离心10min，取上清液冰上

保存供测定NADP+含量。

取0.1mL 血清（浆），加入0.9mL 碱性提取液，煮沸5min,冰浴中冷却后，10000g 4℃离心10min，取

上清液至另一新的离心管中，加入等体积的酸性提取液使之中和，10000g 4℃离心10min，取上清液冰上保

存供测定NADPH 含量。

2、组织中NADP 和NADPH 的提取：

称取约0.1g 组织，加入0.9mL 酸性提取液，冰浴研磨，煮沸5min，冰浴中冷却后，10000g 4℃离心10min，

取上清液至另一新的离心管中，加入等体积的碱性提取液使之中和，10000g 4℃离心10min，取上清液冰上

保存供测定NADP+含量。

称取约0.1g 组织，加入0.9mL 碱性提取液，冰浴研磨，煮沸5min，冰浴中冷却后，10000g 4℃离心10min，

取上清液至另一新的离心管中，加入等体积的酸性提取液使之中和，10000g 4℃离心10min，取上清液冰上

保存供测定NADPH 含量。

3、细胞或细菌中NADP 和NADPH 的提取：

先收集400-500 万细胞或细菌到离心管内，弃上清，加入0.9mL 酸性提取液，超声波破碎1min（强度

20％，超声2s，停1s），煮沸5min，冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min，取上清液至另一新的离心管

中，加入等体积的碱性提取液使之中和，10000g 4 ℃离心10min，取上清液冰上保存供测定NADP+含量。

先收集400-500 万细胞或细菌到离心管内，弃上清，加入0.9mL 碱性提取液，超声波破碎1min（强度

20％，超声2s，停1s），煮沸5min，冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min，取上清液至另一新的离心管

中，加入等体积的酸性提取液使之中和，10000g 4 ℃离心10min，取上清液冰上保存供测定NADPH 含量。

二、测定步骤(在1.5mLEP管中按下表依次加样）：

试剂名称 测定孔(μL)

样本 50

双蒸水

试剂一 250

试剂二 75

试剂三 75

试剂四 75

试剂五 35

对照管可以只做一个，不需每一个样品都多一个对照。充分混匀后，室温避光静置40min

试剂六 500

充分混匀，静置5min 后，20000g，4℃离心5min，弃上清，沉淀中加入：

试剂七 1000

混匀，570nm 下比色。

注意事项

1、若用比色皿测，沉淀用试剂七溶解后必须立即测。最好加一个测一个。

2、若用酶标板测，也必须在测定时再加试剂七，加入1000μL 试剂七溶解沉淀，混匀后，取300μL 至酶标

板中，立即测定。

3、不可将试剂一、二、三和四混合后再加，必须分开加。

三、NADP+和NADPH含量的计算：

（一）NADP+含量的计算

1、血清（浆）中NADP+含量计算

NADP+含量(μmol/L）= (测定管OD 值-0.047）×376

2、组织中NADP+含量计算

(1)按样本蛋白浓度计算

NADP+ (μmol/g prot）= (测定管OD 值-0.047）×37.6÷样本蛋白浓度（g/L）

(2)按样本鲜重计算

NADP+ (μmol/g mass）= (测定管OD 值-0.047）×37.6÷样本鲜重（g/L）

3、细胞或细菌中NADP+含量计算

(1)按样本蛋白浓度计算

NADP+ (μmol/g prot）= (测定管OD 值-0.047）×37.6÷样本蛋白浓度（g/L）

(2)按细菌或细胞密度计算

NADP+ (μmol/104cell）= (测定管OD 值-0.047）×37.6÷细菌或细胞（104 cell /L）

（二）NADPH 含量的计算

1、血清（浆）中NADPH 含量计算

NADPH 含量(μmol/L）= (测定管OD 值-0.047）×855

2、组织中NADPH 含量计算

(1)按样本蛋白浓度计算

NADPH (μmol/g prot）= (测定管OD 值-0.047）×85.5÷样本蛋白浓度（g/L）

(2)按样本鲜重计算

NADPH (μmol/g mass）= (测定管OD 值-0.047）×85.5÷样本鲜重（g/L）

3、细胞或细菌中NADPH 含量计算

(1)按样本蛋白浓度计算

NADPH (μmol/g prot）= (测定管OD 值-0.047）×85.5÷样本蛋白浓度（g/L）

(2)按细菌或细胞密度计算

NADPH (μmol/104cell）= (测定管OD 值-0.047）×85.5÷细菌或细胞密度（104 cell /L）。

 

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