目录号：A1001-01

简介：SupertransgeneTM-1是由一种中性脂质体与一种带有阳离子的新型脂质体相配而成。此项基因转染新技术，是通过合理的分子设计，遵循细胞内涵体PH平衡和破坏机制而研发的。此试剂在不同的试剂浓度及不同类型细胞中均具有优质的转染性能，且具极低的细胞毒性作用，是一种非常容易掌握的方法，可用于悬浮和粘附细胞株的暂时性转染，同样也可用于稳定转染而产生细胞株，也适合动物原生细胞的体外和动物体内的基因转染。优势在于对小鼠胚胎干细胞的转染。

形态：SupertransgeneTM-1以液体形式保存。 

储藏：4℃保存。

稳定性：SupertransgeneTM-1在4℃条件下至少保存一年。

优点：1.在大部分细胞中具有非常高的转染效率。

2.在有血清和无血清的培养基中都具有卓越的性能。

3.极低的细胞毒性，最适合于稳定基因转染。

4. 转染方法非常容易掌握，适合所有的实验设计。

5. 对于小鼠胚胎干细胞和原代细胞的转染效率更高。

6．小鼠体内模型实验，高剂量（3 ml/只）亦无毒性作用。

方法：

 用于粘附细胞：在24孔板上以0.5 ml培养基平铺细胞， 密度为5 - 8 x 104/孔且不加抗生素，在37°C, 5% CO2培养箱中培养16-24h后，细胞达到60 – 80%长满盘时开始准备转染。

 

用于小鼠胚胎干细胞：在24孔板上以0.5 ml培养基平铺细胞， 密度为2-3 x 104/孔且不加抗生素，在37°C, 5% CO2培养箱中培养0-1h之内开始准备转染。

 

用于悬浮细胞：在转染前一天将悬浮细胞分开培养于新鲜培养基中，在转染当天，通过离心收取细胞，弃掉培养基，在24孔板上每孔加0.5 ml培养基，接种5.5 – 8.5 x 105个细胞，不添加抗生素，开始准备转染。

 

a). 取一干净的小离心管，加, 25μl不含血清、蛋白质或抗生素的去离子双蒸水中，加 0.8 µg 的DNA，混匀并震荡几秒钟，保持液体不溅到管壁上。

b). 取另一干净的小管，加25 μl去离子双蒸水，加3- 5 µl的supertransgeneTM-1转染试剂。

c). 将稀释的转染试剂加入到DNA稀释液中，用吸管反复上下混匀6次。

d). 在室温的条件下将转染试剂和DNA溶液孵育15 分钟，形成转染复合物。

e). 立即于每孔中逐滴加入转染混合物，震荡确保每孔中的转染混合物分布均匀。

f).置细胞板于培养箱中培养。

g). 培养有转染混合物的细胞12-24h以后换培养液。

h). 48-72h间检测细胞暂时性转染基因表达产物。

 

当进行稳定转染而产生细胞株时，细胞转染后，应稀释1：4至1：8，加入筛选培养基，置细胞板于培养箱中培养24-72h，以带抗生素的新鲜培养基替代原有培养基。

 

细胞转染条件，DNA，supertransgeneTM-1用量一览表

 

Culture Plate （细胞板）	MediumVolume （培养基体积）	DNA(μg)	SupertransgeneTM-1(μl)	Complexing Volume （混合物体积）
96-well	100 µl	0.2 – 0.3 (10 μl)	0.8 – 1.2 (10 µl)	20 µl
24-well	500 µl	0.8 – 1.2  (25µl)	3 – 5 (25 µl)	50 µl
6-well	2 ml	3.2 – 4.5  (100µl)	10 – 15 (100 µl)	200 µl
60 mm	4 ml	6 – 8  (200 µl)	18 – 25 (200 µl)	400µl
100 mm	15 ml	9 – 12 (500 µl)	27 – 40 (500 µl)	1 ml

 

备注：SupertrangeneTM-1转染试剂仅用于实验室研究。