英文名称： Hieff NGSTM Nano DNA Library Prep Kit for Illumina®
Hieff NGSTM Nano DNA Library Prep Kit for Illumina®
——专注珍贵样本建库
1、研发背景
常规建库方法不适用于珍贵样本
常规DNA建库方法步骤繁多，损失量大，常要求DNA起始量至少在几百纳克至几微克。然而，很多珍贵样本，如来源稀少的临床样本（人血cfDNA/ctDNA等）、考古样本、石蜡包埋样本（FFPE）、冰冻组织穿刺样本等，往往都只能获得100 ng以下的DNA，而且常常是高度片段化的，并带有多种化学修饰的质量偏低的DNA。将常规建库试剂盒应用于该类样本的建库，往往获得的文库产量低，质量差，且原始信息丢失严重。测序数据中的低频信号将完全淹没在背景噪声中，无法获得有效的可供分析的信息。更重要的是，珍贵样本建库一旦失败，将会为您的项目带来重大的损失。
珍贵样本要选择更好的建库试剂
要从珍贵样本中获得有效数量的DNA很不容易，样本量不足是制约其有效建库的重要瓶颈之一。翊圣生物高通量测序领域的科研人员，结合丰富的NGS建库试剂研发经验与测序经验，探讨并设计了专注珍贵样本建库的微量DNA文库构建试剂盒：Hieff NGSTM Nano DNA Library Prep Kit for Illumina®。该款试剂盒主要通过采用高质量的组分构成、优化酶学反应条件、改良缓冲体系、简化DNA片段筛选方法、减少DNA转移次数等技术手段，提高文库转化效率、文库产量及质量，突破了微量或珍贵样本进行常规DNA建库风险高、成功率低的瓶颈，实现了高效、稳定的微量DNA建库与测序。Hieff NGSTM Nano DNA Library Prep Kit for Illumina®最低可将50 pg的DNA制备成适用于Illumina®平台的专用文库，其优异的性能已在微量珍贵样本中得到有效验证，具有文库产量高、质量好，测序覆盖度高、准确性好、偏好性极低等优势，有助于更好的推动NGS技术在临床及基础研究领域的应用。
• 低至50 pg DNA高效建库
• 极其适用于cfDNA、FFPE等珍贵样本建库
• 3小时内高效建库
• 更高的文库转化率
• 获得更好的测序数据
2、产品描述
Hieff NGSTM Nano DNA Library Prep Kit for Illumina®是针对Illumina®高通量测序平台专业开发设计的微量DNA样本建库试剂盒。本试剂盒可将50 pg-250 ng的微量片段化DNA制备成适用于Illumina®测序平台的专用文库，适用于血液或血浆样本中cfDNA，FFPE样本中DNA以及其他珍贵样本的建库。Hieff NGSTM Nano DNA Library Prep Kit for Illumina®使用精心优化的配方体系，提供分步的、线性化的操作方案，具有文库产量高、偏好性低、更易实现自动化等优点。
Hieff NGSTM Nano DNA Library Prep Kit for Illumina®在翊圣已实现规模化生产，试剂盒中提供的所有试剂组分，都经过严格的质量与功能可靠性验证，最大程度上保障产品优异性能与批次稳定性。
3、产品应用：
将50 pg-100 ng片段化DNA制备成适用于Illumina®测序平台的专用文库。
4、产品特点
1）3小时内高效建库
Hieff NGSTM Nano DNA Library Prep Kit for Illumina®兼顾最优酶反应条件和最短的反应时间，大幅度缩短DNA建库时间至3小时以内，耗时与其他公司快速建库试剂盒相当，但显著提高DNA建库效率。
图1 Hieff NGSTM Nano DNA library prep kit for Illumina®的建库效率高。
2）高的文库转化率
文库转化率即DNA片段转化为双端带特定接头DNA片段的效率，是衡量一款建库试剂盒的关键指标。
优秀的文库转化率意味着可以用更低的循环数得到足够上机测序的文库总量，同时降低文库构建过程中所引入的序列偏好性。
图2 Hieff NGSTM Nano DNA library prep kit for Illumina®的文库转化率达到国际一流水准。
样本：片段化E.coli gDNA。接头比例：按各款试剂盒中推荐的数值。测定方法：连接完整接头后，qPCR文库定量。
3）降低循环数
在获得相同产量文库时，使用的PCR循环数越少，表示试剂盒的建库效率越高。
表1 Hieff NGSTM Nano DNA Library Prep Kit for Illumina®的文库产出效率达到国际一流水准。
样本：片段化E.coli gDNA。接头比例：按各款试剂盒中推荐的数值。
4）优秀的文库质量
使用Hieff NGSTM Nano DNA Library Prep Kit for Illumina®对100 pg和100 ng E.coli gDNA建库，所得经分选和未经分选的文库均为单一条带，正态分布，无杂峰，片段大小符合测序要求。
图3 Hieff NGSTM Nano DNA library prep kit for Illumina®获得优秀文库。
建库样本：片段化E. coli gDNA。分选在文库扩增后进行。
5）获得优秀的测序质量
测序数据是反映建库试剂盒性能的最重要指标。
使用Hieff NGSTM Nano DNA Library Prep Kit for Illumina®和品牌N同类型产品用于大肠杆菌基因组DNA文库构建，并使用Illumina Hiseq 4000平台，以PE150模式进行测序。结果显示，Yeasen Nano在Q30、碱基质量、Mapped到的Reads比例、Coverage等方面与品牌N*II相当。
表1 大肠杆菌K12菌株基因组DNA测序数据统计。
Illumina Hiseq 4000, PE 150, reference genome: Escherichia coli str. K-12 substr. MG1655
| Samples | Clean Reads | Clean Base(G) | Q30(%) | Mapped Reads(%) | Coverage(%) | Average Depth(X) | |
| 1 ng Yeasen | 6,909,374 | 1.149 | 91.55 | 91.92 | 95.52 | 179.61 | |
| 1 ng 品牌N*II | 6,864,846 | 1.045 | 91.40 | 90.40 | 94.83 | 175.54 | |
| 100 ng Yeasen | 6,970,936 | 1.069 | 92.86 | 92.25 | 97.21 | 187.34 | |
| 100 ng 品牌N*II | 6,667,866 | 1.018 | 91.83 | 92.11 | 96.92 | 186.90 | |
图4 1ng Yeasen样品测序数据Fastqc报告（左：序列质量分布；右：碱基分布）。
6）卓越性价比
Yeasen致力于为您提供性价比最高的产品！！
图5 Hieff NGSTM Nano DNA Library Prep Kit for Illumina®性价比更高。
5、文献引用
[1]Lan J H, Yin Y, Reed E F, et al. Impact of three Illumina library construction methods on GC bias and HLA genotype calling[J]. Human immunology, 2015, 76(2): 166-175.
[2]Thorner A R, Ziaugra L, Ducar M D, et al. Optimization of library construction for massively parallel sequencing using low-input, FFPE-derived DNA without additional PCR amplification[J]. 2016.
[3]Lakha W, Panteleeva I, Squazzo S, et al. DNA fragmentation and quality control analysis using Diagenode shearing systems and Fragment Analyzer[J]. Nature Methods, 2016, 13(10).
[4] Wolf K, ONeil D, Schroeer S, et al. Next‐Generation Sequencing Library Preparation from FFPE Tissue Samples[J]. Current Protocols in Molecular Biology, 2016: 7.24. 1-7.24. 14.
[5]Apone L, Liu P, Panchapakesa V, et al. Enhancing clinical utility of NGS with reduced bias, low DNA input, library construction[J]. 2016.
[6]Fang N, Löffert D, Akinci‐Tolun R, et al. Construction of a Sequencing Library from Circulating Cell‐Free DNA[J]. Current Protocols in Molecular Biology, 2016: 7.25. 1-7.25. 13.
[7]Nascimento F S, Wei-Pridgeon Y, Arrowood M J, et al. Evaluation of library preparation methods for Illumina next generation sequencing of small amounts of DNA from foodborne parasites[J]. Journal of Microbiological Methods, 2016, 130: 23-26.
6、常见问题
Q: 该款试剂盒适用于哪些样本的建库？
A：本试剂盒适用于所有样本的DNA建库，尤其适合珍贵样本DNA建库，如cfDNA，FFPE样本。
Q: 在使用该款试剂盒时，不同类型的样本的Input DNA量应为多少？
A：Input DNA特指投入末端修复/A尾添加步骤中的DNA。下表列举了常见应用中推荐的Input DNA量。
表1 常见应用中推荐Input DNA量
| 应用 | 样本类型 | 推荐Input DNA量 | |||
| 全基因组测序 | 复杂基因组 | 50 ng-1 μg | |||
| 靶向捕获测序 | 复杂基因组 | 10 ng-1 μg | |||
| 全基因组测序，靶向捕获测序 | FFPE DNA | ≥50 ng | |||
| 全基因组测序，靶向捕获测序 | cfDNA/ctDNA | ≥50 pg | |||
| 全基因组测序 | 微生物基因组 | ≥50 pg | |||
| 全基因组测序PCR-free测序 | 高质量DNA | ≥100 ng | |||
| 免疫共沉淀测序 | ChIP-DNA | ≥50 pg | |||
| 靶向测序 | 扩增子 | ≥1 ng | |||
【注】：上表为使用高质量DNA时推荐的Input DNA量，当Input DNA质量较差或需要进行片段分选时，应适当上调使用量。
Q: 文库制备过程中，是否需要片段长度分选？
A：文库制备过程中需要进行片段长度分选。分选步骤可选择在末端修复/A尾添加之前，或在接头连接之后，或在文库扩增之后进行。
Q: 使用该款试剂盒所得的文库是否可以用于Ion Torrent平台？
A：本款试剂盒针对Illumina®平台开发，所得文库仅适用于Illumina®平台。
Q: 产品的有效期与保存方法？
A：产品所有组分-20°C保存，有效期1年。
Q: 纯化和分选步骤，可以使用哪些磁珠？
A：纯化和分选步骤，建议使用Hieff NGSTM DNA Selection Beads（Cat#12601）或AMPure XP Beads（Cat#A63880）或其他等效产品。
7、订购信息
| 产品 | 货号 | 规格 | 价格（元） |
| Hieff NGSTM Nano DNA Library Prep Kit for Illumina® | 12202ES08 | 8 libraries | 2456.00 |
| 12201ES24 | 24 libraries | 6486.00 | |
| 12201ES96 | 96 libraries | 23567.00 |
8、相关产品推荐
测序文库制备，您还可能用到
| 建库试剂盒 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） | |||
| Hieff NGSTM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina® | 12201ES08 | 8 libraries | 1726.00 | |||
| 12201ES24 | 24 libraries | 4626.00 | ||||
| 12201ES96 | 96 libraries | 16626.00 | ||||
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| ||||||
| 建库模块 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） | |||
| Hieff NGSTM DNA Selection Beads（Superior Ampure XP alternative） | 12601ES03 | 1 mL | 296.00 | |||
| 12601ES08 | 5 mL | 986.00 | ||||
| 12601ES56 | 60 mL | 6286.00 | ||||
| 12601ES75 | 450 mL | 26186.00 | ||||
| Hieff NGSTM End Repair Module | 12605ES20 | 20 T | 1466.00 | |||
| Hieff NGSTM dA-Tailing Module | 12606ES20 | 20 T | 1766.00 | |||
| Hieff NGSTM Fast-Pace DNA Ligation Module | 12607ES24 | 24 T | 3266.00 | |||
| 12607ES96 | 96 T | 10866.00 | ||||
| Hieff NGSTM Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Module | 12608ES24 | 24 T | 2066.00 | |||
| 12608ES96 | 96 T | 6166.00 | ||||
| Hieff NGSTM Fast-Pace DNA Fragmentation Reagent | 12609ES50T | 50 T | 1466.00 | |||
| Hieff NGSTM Single-Indexed Adapter Kit for Illumina®, Set 1 | 12611ES24 | 24 T | 1166.00 | |||
| 12611ES96 | 96 T | 4366.00 | ||||
| Hieff NGSTM Single-Indexed Adapter Kit for Illumina®, Set 2 | 12612ES24 | 24 T | 1166.00 | |||
| 12612ES96 | 96 T | 4366.00 | ||||
| Hieff NGSTM Dual-Indexed Adapter Kit for Illumina® | 12614ES96 | 96 T | 6566.00 | |||
| Hieff NGSTM Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 1 | 12615ES04 | 12×4 T | 1256.00 | |||
| 12615ES16 | 12×16 T | 4536.00 | ||||
| Hieff NGSTM Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 2 | 12616ES04 | 12×4 T | 1256.00 | |||
| 12616ES16 | 12×16 T | 4536.00 | ||||
| 2×Super CanaceTM High-Fidelity Mix for Library Amplification | 12620ES03 | 1 mL | 526.00 | |||
| 12620ES08 | 5×1 mL | 1426.00 | ||||
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| 文库定量 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） | |||
| Hieff NGSTM Library Quantification Kit for Illumina®, qPCR Master Mix | 12302ES05 | 500 T | 1526.00 | |||
| Hieff NGSTM Library Quantification Kit for Illumina®, DNA Standard (1-6) | 12307ES09 | 6×96 μL | 2126.00 | |||
| Picogreen dsDNA Quantitation Reagent 双链DNA（dsDNA）定量试剂 | 10224ES01 | 100 µL | 518.00 | |||
| 10224ES02 | 5×100 µL | 2118.00 | ||||
| 10224ES03 | 10×100 µL | 3848.00 | ||||
| 10224ES04 | 1×1 mL | 3768.00 | ||||
| Picogreen dsDNA Assay Kit 双链DNA（dsDNA）定量检测试剂盒 | 10225ES84 | 2000 T | 4238.00 | |||
更多产品信息请拨打400-6111-883或登陆http://www.yeasen.com/