2×Hieff™ HotStart PCR Master Mix (With Dye)
英文名称: 2×Hieff™ HotStart PCR Master Mix (With Dye)
型号:null    产品货号: xy1011103
价格:请致电:010-57128832,18610462672
品牌: 中国/美国
试剂级别: 分子生物学级

2×Hieff™ HotStart PCR Master Mix (With Dye) 产品描述

2×HotStart PCR Master Mix是即用型的PCR预混合溶液,含有HotStart DNA PolymerasedNTP以及优化的缓冲体系,只需加入引物和模板即可进行扩增,大大简化实验的操作步骤,提高了高通量操作和实验结果的重现性。Mix中加入电泳缓冲液和染料,使得PCR产物可以直接进行电泳,染料的存在不会干扰扩增效率。体系中含有的保护剂使得Mix经过反复冻融后仍可维持酶的活性以及产品的稳定性。PCR产物具有3’-dA突出端,可轻松克隆至T载体。运输与保存方法

冰袋(wet ice)运输。收到产品后放到-20 ºC保存。

2×Hieff™ HotStart PCR Master Mix (With Dye)活性定义                    

用活性化的大马哈鱼精子作为模板/引物,在74ºC30min内摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位(U)。

 

2×Hieff™ HotStart PCR Master Mix (With Dye)应用实例

1.        反应体系配制(50μl):

模板DNA§

optional

引物110 μM

2 μl

引物210 μM

2 μl

2×HotStart PCR Master Mix (With Dye)

25μl

ddH2O

up to 50μl

§ 针对不同模板的最佳反应浓度有所不同,下表为50μl反应体系推荐模板使用量,仅供参考。

人基因组DNA

1500 ng

大肠杆菌基因组DNA

1100 ng

λDNA

0.11 ng

质粒DNA

0.11 ng

2.  PCR循环反应条件

95

5 mina(预变性)

95

30 sec

35个循环

55b

30 sec          

72

60 sec/kb

72

7min(彻底延伸)

a. 如扩增不理想,可适当延长95℃预变性时间,最长可至10 min

 

b. 退火温度需要根据引物的Tm值调整,一般设置成低于引物Tm1-2即可。

2×Hieff™ HotStart PCR Master Mix (With Dye)引物设计注意事项

1.   引物3’端最后一个碱基选择CG

2.   引物3’端最后8个碱基应避免出现连续错配;

3.   引物3’端尽量避免发卡结构的出现;

4.   引物Tm值控制在55-65之间;

5.   引物额外附加序列,即与模板非配对序列,不应参与引物Tm值计算;

6.   引物GC含量控制在40%-60%之间;

7.   正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。