中国<br>试剂级别：分子生物学级Brand,null 产品货号： xy1010762Item#, Hieff™ Long Taq DNA Polymerase长片段DNA聚合酶<br>英文名称： Hieff™ Long Taq DNA Polymerase

Hieff™ Long Taq DNA Polymerase长片段DNA聚合酶 产品描述ong Taq DNA Polymerase是Taq DNA Polymerase与一种含有3’ →5’外切酶活性 (校对活性)的蛋白组成的混合酶，专门用于扩增长片段。其保真性是Taq DNA Polymerase的6倍，配合独特的缓冲体系，Hieff^TM Long Taq DNA Polymerase可从人基因组模板中扩增长达15 kb的片段。PCR扩增产物的3’端带A，可克隆至T载体，其中的PCR Enhancer可有助于扩增高GC含量模板。

用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74℃ 30分钟内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。

Hieff™ Long Taq DNA Polymerase长片段DNA聚合酶 运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。收到产品后放到-20 ºC保存，一年有效。

Hieff™ Long Taq DNA Polymerase长片段DNA聚合酶 质量控制

核酸外切酶残留检测：1U本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。

核酸内切酶残留检测：10 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。

大肠杆菌残留DNA检测: 50 μl体系中，加入2U本品，以ddH₂O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。

功能检测：PCR体系中加入1.25U本品，以100 ng人基因组DNA为模板扩增dystrophin基因。30个循环后取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的15 Kb条带。

注：a, 对于大多数PCR反应，最佳浓度为2 mM。如有需要，可在终浓度1.5-2.5 mM间隔内调整Mg²⁺浓度。

b, 推荐仅当模板GC含量＞60%且优化条件也无法正常扩增时使用，可能会降低保真度。

c, 不同模板最佳反应浓度有所不同，下表为50 μl反应体系推荐模板使用量：

人基因组DNA	10～200 ng
大肠杆菌基因组DNA	1～100 ng
λDNA	0.1～10 ng
质粒DNA	0.1～10 ng

*退火温度需要根据引物退火温度调整，一般设置成低于引物退火温度1-2℃即可。

目的片段＞5 kb

94℃	1-3 min(预变性)
94℃	10 sec	30~35个循环
68℃*	30-60 sec/kb
68℃	7 min（彻底延伸）

*对于> 5 kb的片段，推荐使用长引物，Tm值在68-70℃，把退火/延伸温度合并为68℃。这样可以显著提高扩增特异性。延长延伸时间有助于提高扩增产量。

Hieff™ Long Taq DNA Polymerase长片段DNA聚合酶 注意事项
1. 操作注意事项
由于Long Taq DNA Polymerase在室温下也有一定的反应活性，建议在冰上配制PCR反应体系，再置于PCR仪上进行扩增。这样有利于提高扩增的特异性，减少非特异扩增，得到良好的PCR结果。
2. 引物设计注意事项
1）引物3’端最后一个碱基最好为G或者C；
2）引物3’端最后8个碱基应避免出现连续错配；
3）引物3’端尽量避免发夹结构出现；
4）引物的Tm值调整至55℃-65℃之间。
5）引物额外附加序列，即与模板非配对序列，不应参与引物Tm值计算；
6）引物的GC含量控制在40%-60%之间；
7）正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。