生物素分子纯化预装柱,1ML 英文名称: BiotSep Streptavidin 6FF Chromatography Column, 1ML | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
型号:: 20513ES03 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
价格:请致电:010-57128832,18610462672 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
品牌: yeasen 产品商标: yeasen | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
BiotSep Streptavidin 6FF Chromatography Column, 1ML 生物素分子纯化预装柱,1ML 产品信息
产品描述 Streptavidin Agarose Resin 6FF是一种生物素或生物素化的蛋白、抗体等物质的纯化树脂,其作用原理是基于链霉亲和素与生物之间的相互作用,将链霉亲和素高度交联于6%琼脂糖上,独特的制备工艺使其具有更高的物理化学特性,可以耐受更高的压力,在相对较高的流速下,实现对目的蛋白的纯化,更适于工业大规模蛋白的纯化。 由于链霉亲和素与生物之间的亲和力很强,纯化时需要在变性条件下洗脱;而链霉亲和素对亚氨基生物素的亲和力相对较弱,可以在 pH9.5-11.0 结合,pH4.0 时洗脱,不需要使用变性剂,所以能更好的保持亲和素偶联物的活性。 BiotSep Streptavidin 6FF Chromatography Column, 1ML是装填了Streptavidin Agarose Resin 6FF的一种中压预装柱,规格1ml,预装柱具有标准接口,可以适配商品化的各类中压色谱系统,如ÄKTA 等,方便客户操作。 产品性质
运输和保存方法 冰袋运输。4℃保存,有效期2年。 需准备试剂 所用水和Buffer在使用前最好用0.22µm或0.45µm滤膜过滤除菌。 生物素或生物素化物质的纯化 结合/洗杂缓冲液:150mM NaCl, 20mM NaH2PO4, pH7.4 洗脱缓冲液:8M 盐酸胍,pH1.5 亚氨基生物素标签物质的纯化 结合/洗杂缓冲液:50mM碳酸铵,0.5M NaCl, pH10.0 洗脱缓冲液:50mM碳酸铵,0.5M NaCl, pH4.0 使用方法 【注】样品在上样前最好用0.22µm或0.45µm滤膜过滤,减少杂质以防阻塞柱子。另外,确保样品溶液有合适的离子强度和pH值,可以用结合/洗涤缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释,或者样品用结合/洗涤缓冲液透析。 1样品纯化(以Akta为例) 1)准备:将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子,将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口,将预装柱接到色谱系统中,并旋紧。 2)清洗:3-5倍柱体积去离子水冲洗层析柱中储存液。 3)平衡:用5倍柱体积的结合Buffer平衡层析柱,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。 4)上样:将样品加到平衡好的层析柱中,推荐流速1ml/min,保证目的蛋白与树脂充分接触,提高目的蛋白的回收率,收集流出液,待检测。 【注】:样品的粘度增加使得即使上样体积很少,也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压,使得进样器更难使用。 5)洗杂:用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗,直到紫外吸收达到一个稳定的基线,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液,待检测。 6)洗脱:用洗脱Buffer 采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中,通常5倍柱体积洗脱液足够将目的蛋白洗脱下来。也可以用一个小的梯度,例如20倍柱体积或更多,来分离不同结合强度的蛋白质。 7)清洗及保存:依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料,最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的20%的乙醇中,置于4度保存,防止填料被细菌污染。 2 SDS-PAGE检测 将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测,判定其纯化效果。 3 填料清洗 随着非特异结合蛋白的增多和蛋白的聚集,会造成流速和结合载量性能下降,此时需对填料进行清洗。 1)去除一些沉淀或变形物质 用2倍柱体积的0.1M NaOH或6M盐酸胍或8M尿素溶液进行清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS,pH7.4清洗。 2)去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质 用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积1% Triton X-100清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS,pH7.4清洗。 注意事项 1)请勿冷冻保存本产品。 2)所有操作过程中,样本需要在4℃或冰上操作。 3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 相关产品
|