Celigo® Image Cytometer全视野细胞扫描分析仪是一款最新科技的细胞全孔高速扫描成像分析仪。那何以谓之“全视野”，何以谓之“扫描分析”呢？这款仪器并不是一款简单的整孔一次成像分析设备。首先其分辨率足够高，达到1um成像精度，相当于显微镜10X放大倍数，对于处理单个细胞的信号识别是足够清晰完整的。

Celigo的典型图像如下：

     

全孔和局部截取明场细胞图像       全孔和局部荧光细胞图像（绿色-Calcein，红色PI，蓝色- Hoechst）

其次，在这种成像精度下，如何实现对1536孔，384孔，96孔，24孔，甚至6孔板的全孔成像呢？这涉及到其采用的一个独特光学技术，应用一个大型的F-theta透镜和电磁检流计镜片来对全孔进行大面积快速扫描。其技术原理图如右。在该技术下，透镜的位移完全由电磁推动，安静快速而完全没有机械位移，其精度可小于1um，从而保证了后续的多图像拼接保持了一致性。

这就带来了细胞大规模图像分析的几个好处：

➢原位in situ

在细胞生长的过程中无需消化细胞，无需取样，无需进行任何处理，可在任何时间点随时成像，随时分析，随时获得统计学数据处理结果。

  

贴壁细胞Adherent                                    悬浮细胞Suspension

 

➢全孔 full well
如6孔板一个孔的完整细胞图像，由256张细胞图像拼接而成；96孔板一个孔的完整细胞图像，由16张细胞图像拼接而成。由于每个孔均是高清晰度的全孔细胞分析，从而保证了统计学意义的一致性。（孔与孔之间由于细胞加样量的差异，细胞生长的差异，悬浮沉降细胞移动导致的固定小视野不能准确追踪等问题均得到解决。）

 

➢ 全孔照明亮度的均一

这是由于扫描光路的特性带来的。图像见下：

                       

  Celigo全孔亮度一致，可精确识别细胞             基于传统显微镜的仪器全孔亮度不一，周边难以精确计数

➢ 快速

这是系统的扫描光路电磁透镜技术带来的。其处理全孔高精度图像分析下的处理速度如下：

➢ 整板whole plate
整板的全孔图像预览和曲线分析带来一目了然的细胞分析结果，而这一切均在<10min的速度下完成，从而简单实现多时间点的整板细胞生长分析快速追踪。
适用于各种规格细胞培养板（6/12/24/96/384/1536孔板）和培养瓶(T-25&T-75)。

➢ 多通道multi channels
共有四个通道，采用四个独立的LED光源，包括一个高质量的明场通道，和三个荧光通道。标配：
- 蓝色荧光：ex/em377/477(e.g., Hoechst, DAPI)
- 绿色荧光：ex/em483/536(e.g., FITC, Calcein, Alexa Fluor 488, GFP)
- 红色荧光：ex/em531/629 (e.g., PI, Texas Red, Alexa Fluor 568)
选配：可替换以上三个荧光的任一通道
- Far-Red (e.g. Alexa Fluor 647, DRAQ5)

Celigo能做什么？

Celigo是一款基于多荧光通道细胞成像的快速全孔&整板扫描分析仪，因此基于细胞成像的关于全孔的细胞生长监测和全孔的细胞荧光功能检测的应用，都可以选择Celigo。

➢ 基于高质量明场的细胞生长分析 Label-free assays

1.细胞成像   >>>>>>>>>>   2.细胞图像分析 >>>>>>>>>  3.分析结果
全孔&整板                             细胞图像                       数据统计&处理

灵活的分析软件设计可以通过两种分析方法获取细胞增殖曲线。

方法一：细胞计数法 Cell Counting   方法二：细胞融合度计数法 Cell Confluence

       

  

基于细胞计数法获取的细胞生长曲线   基于细胞融合度获取的细胞生长曲线

 
                          96孔板整板细胞生长曲线呈现

➢ 基于荧光通道的细胞功能分析Fluorescence assays

1.细胞成像   >>>>>>>>>>   2.细胞图像分析 >>>>>>>>>  3.分析结果
全孔&整板                                细胞图像                            数据统计&处理

应用举例：

细胞活性（毒性）分析 Cell Viability(Toxicity)

通过Calcein AM/PI/Hoechst33342三种荧光染料分别标记活/死/全部细胞。通过Celigo可轻松获取全孔&整板细胞图像和自动报告活死细胞百分比，以及不同组别的对照数据。

     

 全孔细胞图像                       局部放大细胞图像                       活细胞曲线图
绿色标记活细胞(Calcein染料)，红色标记死细胞(PI染料)，蓝色标记所有细胞(Hoechst染料)

细胞增殖(DNA合成)Cell Proliferation(DNA Synthesis)

细胞图像数据
A．96孔板全孔A549细胞图像（BrdU-绿色，DAPI-蓝色）；B．局部放大全孔细胞图像（DAPI-所有细胞，BrdU-S期细胞）

  

设门数据

  

克隆形成Colony Formation
Day 0: 单个细胞             Day 7: 单克隆

✓ 6&12&24&96&384&1536孔板中细胞成像；
✓ 快速单克隆鉴定；
✓ 明场下检测单克隆大小；
✓ 亦可特异性荧光表达，挑选阳性克隆。

细胞迁移（损伤修复）Cell Migration(Wound Healing)

使用Oris Platypus专用损伤修复板，通过Celigo自动分析明场&荧光通道细胞数量或细胞融合度，获得损伤修复/迁移的细胞增殖情况。

    

荧光蛋白表达Fluorescence Proteins

96孔板中扫描全孔Hela细胞转染后GFP/RFP表达的情况。

✓ 明场成像所有细胞；
✓ 绿色&红色通道成像荧光蛋白表达细胞；
✓ 无需消化细胞，原位成像；
✓ 全孔成像，所有细胞进行统计学分析，真实体现荧光蛋白的表达情况；
✓ 可精确分析96孔板中不同孔间的表达情况，一目了然获取孔间对比数据。

瞬时转染不同浓度的编码turbo-GFP的质粒到Hela细胞，转染后多个时间点分析96孔板中GFP阳性表达率，GFP阳性细胞数，以及死细胞（PI标记）的百分比。

3D肿瘤球分析3D Tumor Speroid

 
17-AAG和PI-103浓度依赖性的肿瘤球生长抑制。

（a) 细胞接种、加药、Celigo成像和分析流程图；(b-g) 不同药物浓度对肿瘤球生长的抑制情况。

    
96孔板中明场和荧光肿瘤球，分析荧光表达肿瘤球的阳性率

细胞重编程iPSC Reprogramming

                     

计数红色克隆        计数GFP         红绿图像叠加

小鼠胚胎成纤维细胞通过Yamanaka方法诱导生成iPSC，通过Celigo扫描6孔板检测和分析iPSC克隆形成情况。Data courtesy of Kaji Lab, MRC Centre for Regenerative Medicine, University of Edinburgh.

干细胞多能性鉴定Stem Cell Pluripotency

 
诱导后的多能干细胞通过Celigo检测特异性多能干细胞的标记（OCT4，SSEA4）