酵母表达重组蛋白定制服务
1 目的基因的扩增
RT-PCR获得基因所在组织的cDNA或构建cDNA文库
设计引物，PCR扩增目的基因
2 克隆载体与表达载体构建：
将目的基因构建到一系列表达质粒中
构建到表达质粒中的目的基因的DNA测序
3 整合外源基因细胞株的鉴定
将重组质粒DNA导入到感受态酵母细胞
用His-平板筛选转化酵母细胞
用抗生素标记筛选整合外源基因的酵母细胞
用PCR鉴定外源基因在酵母DNA中的重组
4 小量表达并优化表达条件
对几个阳性细胞株进行小量诱导表达
对蛋白表达条件和蛋白纯化方法进行优化
估计目的蛋白表达量，制定纯化策略
5 大量表达和纯化：（纯度>85%）
高表达细胞的大规模培养
细胞收集并进行裂解活收集细胞培养液
亲和层析纯化并进一步的纯化蛋白溶液中的污染物
通过SDS-PAGE或Western blotting分析纯化蛋白
6 特殊纯化处理：（纯度>90%）
切除纯化标志，进一步纯化后进行SDS-PAGE分析
亲和层析除去融合标记，并对收集溶液进行透析
凝胶过滤去除蛋白溶液中的污染物
通过SDS-PAGE或Western blotting分析纯化蛋白
7 高纯度纯化：（纯度>95%）
AKTA层析仪分子筛层析目的蛋白
目的蛋白的降解与变性控制
质谱分析蛋白分子量与蛋白纯度
8 超高纯度纯化：（纯度>98%）
9 蛋白活性检测：
酶活性检测、细胞因子活性检测、结构蛋白抗体结合活性检测
10 蛋白冷冻干燥
附加项目:
高密度发酵转基因酵母细胞
大规模纯化重组蛋白