大肠杆菌表达重组蛋白定制服务
1 目的基因的扩增
RT-PCR获得基因所在组织的cDNA或构建cDNA文库
设计引物，PCR扩增目的基因
2 克隆载体与表达载体构建：
将目的基因构建到一系列表达质粒中
表达质粒中的目的基因的DNA测序
3 评估和优化
将重组质粒DNA导入到感受态细菌中
诱导目的基因表达并选择高表达的转化细胞
通过SDS-PAGE和Western blotting来评定小量表达的结果
估计目的蛋白表达量，制定纯化策略
4 大量表达和纯化：（纯度>85%）
高表达细胞的大规模培养
细胞收集并进行裂解
亲和层析纯化细菌裂解液
进一步的纯化目的蛋白
通过SDS-PAGE或Western blotting分析纯化蛋白
5 特殊纯化处理：（纯度>90%）
切除纯化标志，进一步纯化后进行SDS-PAGE分析
亲和层析除去融合标记，并对收集溶液进行透析
凝胶过滤去除蛋白溶液中的污染物
通过SDS-PAGE或Western blotting分析纯化蛋白
6 高纯度纯化：（纯度>95%）
AKTA层析仪分子筛层析目的蛋白
目的蛋白的降解与变性控制
质谱分析蛋白分子量与蛋白纯度
7 超高纯度纯化：（纯度>98%）
8 去内毒素处理
9 蛋白活性检测：
酶活性检测、细胞因子活性检测、结构蛋白抗体结合活性检测
10 蛋白冷冻干燥