yeasenBrand,null 产品货号： 11139ES50Item#, HifairTM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)<br>英文名称： HifairTM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)

Hifair^TMⅢ 1st Strand cDNA Synthesis Kit

(gDNA digester plus)

产品信息

产品名称	产品编号	规格	储存	价格（元）
Hifair^TM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)	11139ES50	50 T	-20℃	746.00
Hifair^TM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)	11139ES70	200 T	-20℃	2196.00

产品描述

Hifair^TM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)是含有基因组DNA去除步骤的cDNA第一链合成试剂盒。该试剂盒基于Hifair^TMⅢ Reverse Transcriptase而开发。与Hifair^TMⅡ Reverse Transcriptase相比，Hifair^TMⅢ Reverse Transcriptase热稳定性大幅度提高，可耐受高达55℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。

该试剂盒包含gDNA digester，可去除RNA模板中残留的基因组DNA污染，保证后续结果更加可靠。该试剂盒提供两种cDNA合成引物：Random Primers和oligo (dT)₁₈，用户可根据需要，选择Random Primers，Oligo (dT)₁₈或Gene Specific Primers作为逆转录引物，合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR或者qPCR反应。

产品组分

编号	组分	产品编号/规格
编号	组分	11139ES50 (50 T)	11139ES70 (200 T)
11139-A	RNase free ddH₂O	1 mL	4 × 1 mL
11139-B	5×gDNA digester Buffer	100 μL	4 ×100 μL
11121-C	gDNA digester	50 μL	4× 50 μL
11139-D	5×Hifair^TMⅢ Buffer plus	200 μL	4 ×200 μL
11139-E	Hifair^TM Ⅲ Enzyme Mix	100 μL	4× 100 μL
11139-F	Oligo (dT)₁₈(50 μM)	50 μL	4× 50 μL
11139-G	Random Primers (50 ng/μL)	50 μL	4× 50 μL

【注】：1) 5×Hifair^TMⅢ Buffer plus包含dNTP和gDNA digester抑制剂；

2) Hifair^TM Ⅲ Enzyme Mix包含RNase inhibitor。

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存。

注意事项

1）反应液的配制应在冰上操作完成，操作过程应避免RNase污染；

2）如果加入RNA模板体积较大 (如超过2 μL)，请确保RNA是溶于水中而不是TE中，因为TE会对gDNA去除以及逆转录反应产生抑制；

3）可以不经过基因组去除步骤，直接进行逆转录，这样所得到的结果会与使用Hifair^TM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis Kit （Cat No. 11135ES）效果一致。但是请勿将gDNA digester与11135ES中的5×Hifair^TMⅢ Buffer配套使用，因其不含终止gDNA digester反应的成分，会影响反转录和后续的qPCR实验；

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

引物选择

1. 若后续为PCR实验

1）如果模板为真核生物来源，建议选择Oligo (dT)₁₈，与真核生物mRNA的3’ Poly A尾配对，可获得最高产量的全长cDNA。

2）基因特异性引物(GSP)的特异性最高。但有些情况下，用于PCR反应的GSP无法有效引导第一链cDNA合成时，可改用Oligo (dT)₁₈或Random Primers重新进行逆转录。

3）Random Primers特异性较低，所有RNA，包括mRNA、rRNA、tRNA均可作为Random Primers的模板。当目标区域具有复杂二级结构或GC含量较高，或者模板为原核生物来源，且使用Oligo (dT)₁₈或基因特异性引物(GSP)无法有效引导cDNA合成时，可使用Random Primers作为引物。

2. 若后续为qPCR实验

建议将Oligo (dT)₁₈和Random Primers混合使用，可使mRNA的各个区域均能以相同效率引发cDNA合成，有助于提高定量结果的重复性。

第一链cDNA合成操作步骤

一、若后续为PCR实验

1. 残留基因组DNA去除

在RNase free离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2 min。

组分	使用量
RNase free ddH₂O	To 10 μL
5×gDNA digester Buffer	2 μL
gDNA digester	1 μL
模板RNA	Total RNA: 10 pg -5 μg或mRNA:10 pg-500 ng

2. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）

组分	使用量
RNase free ddH₂O	To 20 μL
上一步的反应液	10 μL
5×Hifair^TMⅢ Buffer plus	4 μL
Hifair^TM Ⅲ Enzyme Mix	2 μL
Oligo (dT)₁₈(50 μM) or Random Primers (50 ng/μL) or Gene Specific Primers (2 μM)	1 μL
	or 1 μL
	or 1 μL

3. 逆转录程序设置

温度	时间
25℃	5 min
50℃	30-60 min
85℃	5 min

【注】：1）当使用Random Primers时，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)₁₈或Gene Specific Primers，此步可省略；

2）逆转录温度：推荐使用50℃。对于高GC含量模板或者复杂模板，可将逆转录温度提高到55℃。

※ 逆转录产物可立即用于后续PCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。

二、若后续为qPCR实验

1. 残留基因组DNA去除

在RNase free离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2 min。

组分	使用量
RNase free ddH₂O	To 10 μL
5×gDNA digester Buffer	2 μL
gDNA digester	1 μL
模板RNA	Total RNA: 10 pg -5 μg或mRNA:10 pg-500 ng

2. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）

组分	使用量
RNase free ddH₂O	To 20 μL
上一步的反应液	10 μL
5×Hifair^TMⅢ Buffer plus	4 μL
Hifair^TM Ⅲ Enzyme Mix	2 μL
Oligo (dT)₁₈(50 μM)	1 μL
Random Primers (50 ng/μL)	1 μL

3. 逆转录程序设置

温度	时间
25℃	5 min
50℃	30 min
85℃	5 min

【注】：逆转录温度：推荐使用50℃。对于高GC含量模板或者复杂模板，可将逆转录温度提高到55℃。

※ 逆转录产物可立即用于后续qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。

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