Phenyl Bio-sep HP 英文名称: Phenyl Bio-sep HP | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
型号:null 产品货号: 13-45 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
价格:请致电:010-57128832,18610462672 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
品牌: 西安 试剂级别: 色谱级 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
1.外观:本品为白色球状凝胶,无嗅、无味、无肉眼可见杂质。 2.理化指标
*柱子:内径50mm、柱长30cm。柱床高15cm,25℃, 流动相为0.1mol/LNaCl。 3.包装 产品以聚胺酯瓶密封包装,外贴标签,注明“品名、体积、颗粒大小、保质期、批号、生产日期、生产单位及地址” 等内容。所选用的包装应有利于保证产品质量、方便运输和贮存。 4. 运输 运输中应避免日晒、雨淋、重压,严禁与有毒、有害物品混运。 5. 贮存 产品应密封贮存在4℃~30℃(保存溶液为20% 乙醇+0.1M醋酸钠),通风、干燥、清洁的地方。不能冷冻。 用过的柱子贮存在4℃(20% 乙醇)。 6. 保质期:暂定5年。 7. 应用:***基琼脂糖微球是一种疏水层析介质,利用样品中组分疏水性的不同进行分离。用于生物大分子的纯化分离。下面简要介绍介质的使用过程。 7.1 装柱 ⑴ 让所有的材料和试剂达到室温。配制初始缓冲液(平衡液)和洗脱缓冲液。 ⑵ 根据柱子大小取所需量的凝胶,清洗掉20%乙醇,抽干,用初始缓冲液(按凝胶:缓冲液=3:1的比例)配成匀浆。匀浆作脱气处理。 ⑶ 将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位(液面略高于滤膜),务必使底端无气泡。 ⑷ 用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意勿使产生气泡。打开柱子出液口,使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。 ⑸ 打开蠕动泵,让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过,使柱床稳定。用2~3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。 7.2 平衡 让平衡缓冲液以一定流速流过柱子,到流出液电导和pH不变。平衡缓冲液一般是高盐浓度的缓冲液,如0.02~0.05mol/L的PBS加1~2.5mol/L(NH4)2SO4等。 7.3 上样 ⑴ 样品用平衡液配制,浑浊的样品要离心和过滤后上样。 ⑵ 一般情况是让目标产品结合在柱子上,用平衡液洗去杂质,再选择一种洗脱液洗下目标产品。 ⑶ 介质对样品组分吸附的程度取决于样品的疏水性质、流动相的离子强度和温度。盐浓度大、温度高或样品组分疏水性强,介质对组分吸附牢。 7.4 洗脱 疏水介质可用减小盐浓度进行洗脱。加表面活性剂或有机溶剂可加强洗脱。最常用的洗脱液是低盐浓度缓冲液,如0.02~0.05mol/L的PBS。 7.5 再生 一般用低盐浓度的缓冲液洗,洗10倍以上柱体积,接着用结合蛋白的平衡液洗到平衡,可再次使用。 若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉,可用在位清洗(CIP)除去。 7.6 在位清洗 ⑴ 对于以离子键结合上去的蛋白,可以用2M Nacl去除。 ⑵ 对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂类,可用1M NaOH 去除。 ⑶ 对强疏水性结合的蛋白、脂类等,用4~10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗,但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加,否则容易产生气泡。 清洗完毕后,用至少3倍缓冲液平衡柱子。 7.7 注意 在装柱、使用和保存柱子的时候,要避免柱子流干,气泡进入。 7.8 去热源 用0.5M的氢氧化钠清洗柱子5~6小时或用0.1M的氢氧化钠24小时。或用以下方法步骤去除: ⑴ 2倍柱体积的70%乙醇 ⑵ 2倍柱体积50mM Tris-Hcl pH7.5 ⑶ 1倍柱体积4M尿素 ⑷ 3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1M Nacl 以上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制 7.9 消毒 用0.5~1M NaOH室温下洗8~10倍柱体积,初始缓冲液平衡柱子。 7.10 灭菌 置介质于高压灭菌锅中120℃下20分钟。 |