Phenyl、Butyl、Octyl Sepharose Fast Flow预装柱（预处理及中度纯化介质：疏水性的顺序为：Octyl
型号:： 17-1353-01
价格:请致电：010-57128832,18610462672
品牌: 美国

工艺开拓，小量制备

法Protein G QZT 4FF广泛用于各种抗体的分离纯化。层析操作通常包括装柱、平衡、进料、淋洗、洗脱、再生等步骤。平衡：用5~10CV的平衡缓冲液（20 mM PB+0.15M NaCl，pH 7.0，添加适当浓度的NaCl抑制非特异性吸附）平衡层析柱，至流出液电导和pH不变（与平衡液一致）。　　进料：样品缓冲液应尽可能与平衡液一致。固体样品可用平衡液溶解配制；低浓度样品溶液可用平衡液透析；高浓度样品溶液可用平衡液稀释。为了避免堵塞层析柱，样品应经离心或微滤（0.45μm）处理。进料量根据介质的载量和料液中目标蛋白的含量计算。　　淋洗：上样完毕后继续用平衡缓冲液淋洗至基线。洗脱：用洗脱缓冲液（20 mM柠檬酸，pH 2.5-3.5；或0.1M甘氨酸，pH 3.0；或20 mM乙酸钠，pH 3.0；具体洗脱条件与抗体的结合强度和稳定性密切相关，效果不好时应进行洗脱缓冲液（种类和pH或添加剂）的优化）洗脱，收集流出液。洗脱后，应立刻用碱性缓冲液（如1M Tris/HCl, pH 9.0）将收集到的抗体溶液中和到抗体稳定的pH，避免抗体失活，维持抗体的生物活性。　　再生、原位清洗：介质使用数次（5-10次，具体次数与原料的种类和来源及实验要求有关）后，需要对介质进行再生、在位清洗。（1）用0.1M的乙酸或0.1M的乙酸/20%乙醇淋洗柱子3-5CV，然后用缓冲液洗到中性即可重复使用；（2）也可用70%乙醇或6M盐酸胍淋洗柱子3-5CV，并用3~10 CV的纯水冲洗，然后用缓冲液洗到中性即可重复使用。　　其它注意事项：在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干，气泡进入。4. 具体应用 1 载量分析：利用人免疫球蛋白（血浆来源，纯度95%，3mg/ml）进行载量分析（柱体积2ml；Buffer A：20 mM PB+0.15M NaCl，pH 7.0，Buffer B：0.1M甘氨酸，pH 3.0；流速：0.5ml/min；上样量：25ml），层析谱图如图1（A：本中心介质；B：进口介质）所示，结果表明两种介质的层析谱图（穿透行为、洗脱峰）基本一致，无明显差异。洗脱峰的蛋白浓度分析结果表明，二者的载量相当，均在20-25mg h-IgG/ml介质之间。2 纯化效果分析：利用小鼠腹水（Buffer A稀释4倍）上样进行亲和层析，考察介质的分离纯化效果（柱体积2ml；Buffer A：20 mM PB+0.15M NaCl，pH 7.0，Buffer B：20mM柠檬酸，pH 3.0；流速：0.5ml/min；上样量：4ml），层析谱图如图2所示，纯度分析结果表明，经过一步亲和层析，即可得到纯度95%以上的IgG（图3）。图1 h-IgG在Protein G介质上的动态穿透曲线（A：本中心介质；B：对照介质）图2 Protein G亲和层析谱图（小鼠腹水）图3 小鼠腹水经Protein G纯化所得IgG产品的高效液相（Superdex 200）分析谱图（A：本中心Protein G介质；B：对照Protein G介质）5 特色服务（1）提供介质筛选及工艺开发的咨询。（2）接受客户委托开发各种分离介质和分离工艺。（3）按客户要求提供各种介质及相应规格的预装柱。（4）为客户提供专业的售前和售后服务。