亲和介质使用手册.pdf

His标签蛋白纯化介质

1、概述

金属螯合层析，又称固定化金属离子亲和层析（Immobilized metal ion affinity chromatography，IMAC）。该法利用蛋白质表面的某些氨基酸（如组氨酸、色氨酸、半胱氨酸等）和金属离子（Cu²⁺、Zn²⁺、Ni²⁺等过渡金属离子）发生特殊的相互作用的原理来实现蛋白质的分离。琼脂糖亲和介质（Ni）是将金属离子Ni²⁺螯合在琼脂糖凝胶上形成的一种亲和层析介质，具有吸附容量大、选择型好、易于再生、成本低等优点，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质及多肽的分离纯化，尤其是组氨酸标记蛋白质的高效纯化。

2、琼脂糖亲和介质（Ni）的应用

 

纯化组氨酸标记的乳酸脱氢酶

层析柱：6.4 cm × 1.0 cm I.D.，CV=5 ml
        样品：组氨酸标记的LDH发酵液（0.45μm滤膜过滤，上样10ml）
        流速：1ml/min
       平衡缓冲液（A）：20mM PB + 0.1M NaCl + 50mM 咪唑, pH 7.4
        洗脱缓冲液（B）：20mM PB + 0.1M NaCl + 0.5M 咪唑, pH 7.4
        1: 发酵液
        2: 中心生产介质的流穿峰P0
        3: 中心生产介质的洗脱峰P1
        4: 进口介质的流穿峰P0
        5: 进口介质的洗脱峰P1 

采用本中心生产的琼脂糖亲和介质（Ni）从发酵液中纯化His-tag LDH（组氨酸标记的乳酸脱氢酶），并与进口介质相比较。右图为琼脂糖亲和层析介质（Ni）纯化LDH的色谱图和电泳分析图。结果显示中心生产的琼脂糖亲和层析介质（Ni）与进口同类产品的纯化效果相当。活性分析结果表明，采用本中心生产的琼脂糖亲和层析介质（Ni）纯化得到的LDH的活性回收率达到80%以上，可以实现对进口介质的替代。

3、产品与服务

本中心目前可提供IDA（亚氨基二乙酸）、NTA（次氨基三乙酸）和CM-ASP（羧甲基天冬氨酸）三种不同螯合配体的Ni金属螯合介质，并可根据客户需求提供螯合其它金属离子（Cu²⁺、Co²⁺、Zn²⁺、Fe³⁺等）的介质。此外，为了解决金属离子残留问题，本中心还开发了未螯合金属离子的空白胶，用于吸附去除产品中残留的金属离子。 

4、规格

货号		C-03
产品名称		镍亲和介质
配基密度		15 ~120mmol/mL
pH稳定性		3 ~ 13
粒径范围(μm)		45 ~ 165
最大流速(cm/h)		400
应用		用于含组氨酸标签蛋白的纯化
价格(￥)	50mL	3000
	250 mL	10000
	1 L	25000