Sephadex LH-20葡聚糖凝胶
——最适合天然产物的纯化,特别是嗜脂性分子纯化及制备
Sephadex 葡聚糖凝胶通过表氯醇交联多个葡聚糖得到的。
葡聚糖是以蔗糖为底物的细菌Leuconsostocmesenteroides的代谢产物，为线性高度聚合碳水化合物的总称。由于每个葡聚糖单元含有三个羟基，因此葡聚糖易溶于水。要使葡聚糖不溶于水，而成为可以在水中溶涨的凝胶，就必须与双官能团的表氯醇交联。表氯醇的比例越大，交联成分越高，胶的溶涨能力就越小，排阻极限就越低，这时的产品为G-10、G-25等。
我们知道G-10、G-25这些葡聚糖凝胶是在水溶液中使用，若要用有机溶剂作为流动相，只有通过羟丙基化将Sephadex G转化为可在有机溶剂中溶涨的葡聚糖凝胶。这时的产品为Sephardex LH-20.或LH-60。
层析原理:
- 凝胶过滤--------依赖于分子的大小和形状
- 吸附层析-----依赖于被分离化合物与凝胶之间的氢键数量和质量
- 分配层析----------------依赖于被分离化合物在流动相（溶剂）和固定相（凝胶）之间的分配，这主要由样品的极性和溶剂的极性决定的。
特点:
- 适合用有机溶剂分离嗜脂性分子，可以非常经济地大规模制备各种天然产物
- 结合凝胶过滤、分配色谱及吸附性层析于一身，分离结构非常相近的分子
- 载量可高达300mg样品/ml凝胶，极少需要再生，分离效果可保持十几年不变
Sephadex LH-20性质
| Sephadex LH-20性质和操作 | 干胶溶胀表 |
| 排阻极限 | 4-5KD(球蛋白) | 溶剂 | 溶胀体积(ml凝胶/g干胶粉末) |
| 上样量 | 取决于所需分辩率 | Dimethyl sulphoxide 二甲亚砜 | 4.4-4.6 |
| 尺寸排阻模式 | 小于总体积的20% | Pyridine 嘧*** | 4.2-4.4 |
| 正相分配模式 | 小于总体积的1% | Water 水 | 4.0-4.4 |
| 胶粒形状 | 球形,多孔 | Dimethylformamide 二甲基甲酰胺 | 3.8-4.2 |
| 颗粒大小(干) | 18-111μm(直径) | Saline 生理盐水 | 3.9-4.1 |
| 颗粒大小中间值(干) | 70μm(直径) | Methanol 甲醇 | 3.8-4.1 |
| 颗粒大小(甲醇) | 27-163μm(直径) | Methane dichloride 二氯乙烷 | 3.8-4.1 |
| 颗粒大小中间值(甲醇) | 103μm(直径) | Chloroform 氯仿 | 3.8-4.1 |
| 最大线性流速 | 720cm/h | Proanol 丙醇 | 3.7-4.0 |
| 参考线性流速 | 60cm/h | Ethanol 乙醇 | 3.6-3.9 |
| pH的稳定性 | | Isobutanol异丁醇 | 3.6-3.9 |
| 操作过程 | 2-11 | Formamide 甲酰胺 | 3.6-3.9 |
| 清洗过程 | 2-13 | Methylene dichloride 二氯甲烷 | 3.6-3.9 |
| 化学稳定性 | 在许多水溶液中都稳定 | Butanol 丁醇 | 3.5-3.8 |
| 有机溶剂系统中都稳定. | Isopropanol异丙醇 | 3.3-3.6 |
| 高压灭菌 | Tetrahydrofuran 四氢呋喃 | 3.3-3.6 |
| 高压灭菌 | 121 ℃, 20min | Dioxane 二氧杂环己烷 | 3.2-3.5 |
| 操作温度 | 4℃-40℃ | Acetone丙*** | 2.4-2.6 |
| 保存条件 | | Acetonitrile乙*** | 2.2-2.4 |
| 新填料 | 4-25℃ | Carbon tetrachloride 四氯化碳 | 1.8-2.2 |
| 使用后填料 | 4-8℃, pH6-8, 勿冷冻, | Benzene *** | 1.6-2.0 |
| | 加入抑菌剂(如20%乙醇,0.04%叠氮钠) | Ethyl acetate乙酸乙酯 | 1.6-1.8 |
| | Toluene甲*** | 1.5-1.6 |