产品描述: 超敏基因组PCR扩增检测试剂盒(Genotyping PCR Kit)专门为基因组及微量DNA PCR扩增检测设计优化,可从少量基因组模板中高效扩增出0.2kb~4kb的目的条带,其灵敏度为普通PCR反应的100~10,000倍。适用于基因组PCR扩增、微量模板、复杂模板等的扩增和大规模基因检测。本产品包括2X反应缓冲体系和酶2个独立的组分,其2X Reaction Mix包含了genotyping PCR所需的全部试剂、dNTP及PCR增强剂。本产品使用方便快捷,使用时只需在2X Reaction Mix加入引物、模板及酶并加入去离子水稀释至1X即可进行反应。2X Reaction Mix提供不含染料/含染料(蓝色)两种形式供您选择,经测试,染料的加入不影响扩增性能。2X Reaction Mix中预混蓝色染料的,在配置反应体系时,可很方便地检测各组分混匀情况,在PCR反应完成后可直接电泳,节省时间。 产品用途: 本品适用于从复杂背景中扩增微量模板DNA。由于Genotyping PCR的突变率高于普通PCR反应,故其产物不推荐用于需高保真的基因克隆。Genotyping PCR所用引物需精心设计,否则会扩增出较多杂带(参见PCR引物设计的黄金法则)。 使用说明: 经测试按右侧反应体系及PCR程序可获得理想的扩增结果。推荐将此反应体系及PCR程序作为条件优化的初始反应。 扩增灵敏度检测对比 普通Taq酶扩增系统(上图) vs 超敏基因组PCR扩增检测系统(下图): 用浓度为100ng/μl的人基因组DNA将浓度1ng/μl含LacZ基因的质粒梯度稀释至一下浓度梯度: 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 0.1ng/μl | 0.01ng/μl | 1pg/μl | 0.1pg/μl | 0.01pg/μl | 1fg/μl |
从每个浓度梯度中各取1μl作为扩增模板,分别用普通Taq酶扩增系统(上图) 及超敏基因组PCR扩增检测系统(下图)对LacZ基因进行扩增(都分别进行40轮PCR扩增循环)。 结果显示:超敏基因组PCR扩增检测系统检测灵敏度比普通Taq酶扩增系统高1,000倍以上。 泳道M: DL2000 DNA Marker; 泳道1~6:分别对应以上各模板浓度梯度 | 
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| 产品内容: Taq DNA 聚合酶 (5U/μl) | 30μl | 2X GT PCR Reaction Mix | 1m |
质量保证: 使用推荐体系及PCR程序(见下),可从100ng人基因组DNA背景中扩增检测出1fg LacZ质粒模板的存在。 超敏基因组PCR扩增检测反应体系:
2X Reaction Mix | 10μl | 上游引物 | 0.05μM(终浓度) | 下游引物 | 0.05μM(终浓度) | 模板DNA | 1~3μl DNA样品 | Taq酶(5U/μl) | 0.25 | ddH2O | 至20μl | *反应体系可成比例调整至50μl等体积 |
超敏基因组PCR扩增检测PCR程序 93℃ | 1分钟30秒 | 40次循环: | 93℃,30秒 57℃,30秒 (57℃适用于大多数反应 亦可在55~60℃间调整) 65℃,按产物长度60秒/1kb 计算 |
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