产品描述: 本制品是将PCR反应所需的Super Taq Plus DNA聚合酶、dNTP、MgCl2、反应缓冲液以及优化剂以及稳定剂,预先配置成2倍浓度的混合物。使用时只需在加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应,使用非常方便,并减少了产生污染的机会。 2X Super Taq Plus Master Mix专为基因组DNA等复杂模板快速PCR扩增检测设计优化,具有扩增快速、高灵敏度、抗干扰能力强等,并具有一定的保真特性,能部分纠正DNA扩增过程中所出现的错误。与2×Super Taq DNA Master Mix相比,具有扩增长度增加(简单模板扩增长度可达30kb,复杂模板可有效扩增10kb), 保真度好的特点;与2×Fast Pfu DNA Master Mix相比,具有扩增速度更快,扩增灵敏度更高的优点。 产品用途: 1)可替代大部分Super Taq DNA聚合酶的用途; 2)需高灵敏度的PCR扩增; 3)大片段PCR扩增反应 (可达30 kb) ; 使用说明: 使用时只需在加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应,详细反应体系及PCR循环请参考右侧信息栏。 使用建议: 使用本制品扩增得到的PCR产物具有3'端"A"突出,可直接克隆于T-Vector中。 | 1X Super Taq Plus Master Mix成份: 25 units/ml SuperTaq Plus DNA 聚合酶; 1X反应缓冲体系 (pH 8.5), dATP, dGTP, dCTP, dTTP各200μM, 1.5mM MgCl。 活性定义: 在74oC条件下,30分钟内催化10nmol dNTP的 掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。 质量保证: 经多次柱纯化,SDS-PAGE检测仅可见清晰单一的目的条带;PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留,无核酸内、外切酶污染。 常用反应体系(50μl) 2X Super Taq Plus Master Mix | 25μl | 上游引物 | 0.2-1.0μM(终浓度) | 下游引物 | 0.2-1.0μM(终浓度) | 模板 | 1-50ng(质粒) 1ng-500g(基因组) | ddH2O | 至50μl | *Mg2+终浓度为2mM |
常用PCR循环 当扩增片段<3K: | 94℃ | 1分钟30秒 | 30次循环: | 94oC,30秒 | 57℃,30秒 | 72℃,根据产物长度调整,15秒/1kb | 72℃ | 5分钟 | 4℃ | 保温 | | | 当扩增片段≥3K((推荐引物长度≥30bp): | 94℃, | 20秒 | 30次循环: | 94℃,5秒, | 68℃,根据产物长度调整,15秒/1kb | 72℃ | 5分钟 | 4℃ | 保温 |
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