产品描述: 本制品是将PCR反应所需的Taq酶、dNTP混合物、MgCl2以及反应缓冲液预先配置成2倍浓度的混合物。SinoBio 2X Taq Master Mix专为常规PCR扩增反应优化,扩增长度可达8kb,能对4kb及其以下长度的片段进行高效地扩增。使用时只需在加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应,大大地简化了操作过程,减少了PCR操作过程中的污染。SinoBio 2X Taq Master Mix提供含染料(蓝色)/不含染料两种形式供您选择。经测试,染料的加入不影响PCR反应,在PCR反应完成后可直接电泳,节省时间。 特点: - 高效:以λDNA为模板,扩增长度可达8kb,能高效扩增≤4kb片段(图例一)。
- 灵敏:可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出特定基因片段(图例二)。
- 稳定:反复冻融几十次,4oC放置30天,室温放置一周后,扩增性能不受影响。
- 快捷:PCR反应所必需试剂全集于一管之中,数分钟即可完成反应体系配置。
- 便利:10μl, 25μl 或50μl体系全部适用。PCR反应后可直接电泳(含染料形式)。
产品用途: 1)常规PCR鉴定; 2)小片段目标基因克隆; 3)平端PCR产物加A; 使用建议: 使用本试剂扩增得到的PCR产物3'端有一突出“A”碱基,可直接克隆于T载体中。当扩增较长片段时,推荐使用SinoBio Taq plus Master Mix, Taq plus 对于较长的DNA片段扩增具有更高的扩增效率及保真度 图例一) 使用普通(A组)及含染料(B组)的2XTaq Master Mix配置的50μl扩增体系中,以5ngλDNA为模板,对500bp~6.0KB片段的扩增结果。 泳道1:500bp; 泳道2:1kb; 泳道3:2kb; 泳道4:4kb; 泳道5:6kb; 泳道M:DL1K Marker
图例二)5 0 μ l扩增体系中,分别以50ng~0.05ng人基因组DNA为模板,可对特定基因片段(380bp)进行很好的扩增。 模板量: 泳道1:50ng; 泳道2:5ng; 泳道3:0.5ng; 泳道4:0.05ng; 泳道M:DL2000 DNA Marker | 
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| 1X Taq Master Mix成份: 25 units/ml Taq DNA聚合酶 1X反应缓冲体系(pH 8.5), dATP, dGTP, dCTP, dTTP各200μM, 2mM MgCl2。 活性定义: 在74oC条件下,30分钟内催化10nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。 质量保证: 经多次柱纯化,SDS-PAGE检测纯度大于95%;PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留,无核酸内、外切酶污染。 常用反应体系(50μl) 2X Taq Master Mix* | 20μl | 上游引物 | 0.2-1.0uM(终浓度) | 下游引物 | 0.2-1.0uM(终浓度) | 模板 | 1-50ng(质粒) 10ng-1μg(基因组) | ddH2O | 至50μl | *Mg2+终浓度为2mM |
常用PCR循环 当扩增片段<3K: | 94℃ | 1分钟30秒 | 30次循环: | 94oC,30秒 | 57℃,30秒 | 72℃,根据产物长度调整,60秒/1kb | 72℃ | 5分钟 | 4℃ | 保温 | | | 当扩增片段≥3K((推荐引物长度≥30bp): | 94℃, | 20秒 | 30次循环: | 94℃,5秒, | 68℃,根据产物长度调整,60秒/1kb | 72℃ | 5分钟 | 4℃ | 保温 |
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