Fast Pfu DNA聚合酶
型号:null    产品货号: E031-01A
价格:请致电:010-57128832,18610462672
品牌: sinobio

SinoBio Fast Pfu DNA聚合酶

dNTP混合液

不含dNTP混合液

E031-01A

250U

360

E031-02A 

250U

260

E031-01B

A包装×5

1,620

E031-02B

A包装×5

1170

产品描述:
Pfu DNA
聚合酶为最常用的高保真DNA聚合酶,在需高保真的PCR反应中广范使用,然而Pfu酶扩增灵敏度不高,延伸速度缓慢(0.5kb/分钟)给众多的使用者带来了不便。针对普通Pfu酶的以上缺点,SinoBio采用分子进化技术对普通Pfu酶进行改造,制备的新型聚合酶Fast Pfu酶具有快速、高灵敏度、抗干扰能力强等特点,是新一代的
高保真DNA聚合酶。使用Fast Pfu能获得更理想的扩增结果,并大幅度缩短扩增反应时间。

特点:

  • 高保真:具有同Pfu酶相同的保真度,为普通Taq酶的10倍。
  • 快速:Fast Pfu扩增速度为普通Pfu酶的数倍,72oC保温30秒可延伸1kb以上。
  • 高效:以λDNA为模板,扩增长度可达12kb,能高效扩增≤6kb片段;对于人基因组DNA等复杂模板,能有效扩增出3kb特定基因片段。
  • 独特配方的5×Buffer:使PCR扩增反应更加稳定、灵敏、高效。

产品用途:
用于要求保真度比较高的PCR反应,包括克隆PCRDNA片段拼接、引入突变、全基因合成等(参见 SinoBio 实验方案)

使用建议:
Fast Pfu DNA
聚合酶产生的PCR产物为平滑末端,无3'"A"突出, PCR产物的克隆有两种方案:
1.PCR
前引物进行5'端加***修饰或将PCR产物***酸化处理后再直接克隆于平滑末端的载体中(参见 Sinobio 实验方案)。
2.
将产物3'末端加A后再与T-Vector连接(参见 SinoBio 实验方案)。

*
由于Fast Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3′端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度,理想的引物长度为 20-30碱基。另外为了减少由3′-5′外切酶活性引起的引物降解, 尽量在冰上配置反应体系,并最后加入Fast Pfu酶。

图例一)5 0 μ l扩增体系中,分别以50ng0.05ng人基因组DNA为模板,可对特定基因片段(1.2kb)进行很好的扩增。
 
模板量:
 
泳道150ng
 
泳道25ng
 
泳道30.5ng
 
泳道40.05ng
 
泳道MDL2000 DNA Marker

 

 

产品包装:

Fast Pfu DNA聚合酶 5U/ul

50μl

dNTP混合液(各10mM

200μl

5×Fast Pfu Buffer with Mg2+

2ml

10×Super Taq Plus Buffer with Mg2+

1ml

质量保证:
经多次柱纯化,SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带;PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留,无核酸内、外切酶污染。

活性定义:
74oC条件下,30分钟内催化10nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。

常用反应体系(50μl

5×Fast Pfu Buffer*

10μl

上游引物

0.2-1.0μM(终浓度)

下游引物

0.2-1.0μM(终浓度)

dNTP(10mM)

1.0μl

模板

50ng(质粒)
10ng-1μg(
基因组)

Sinobio Fast Pfu

1-0.25μl1.25U

ddH2O

50μl

*Mg2+终浓度为2mM

常用PCR循环
当扩增片段<3K

94oC

 1分钟30

30
循环

94oC30
57oC
30
72oC
,根据产物长度调整,30/1kb

72oC

5分钟

4oC

保温

当扩增片段≥3K(推荐引物长度≥30bp):

94oC

 20

30
循环

94oC5
68oC
,根据产物长度调整,30/1kb

72oC

5分钟

4oC

保温