产品描述:
本制品是将PCR反应所需的Fast Pfu酶、dNTP、MgCl2、反应缓冲液以及优化剂以及稳定剂，预先配置成2倍浓度的混合物。2×FastPfu Master Mix专为扩增克隆DNA片段优化，高保真，错误率仅为1.3x10-6。使用时只需在加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应，非常方便。较普通Pfu酶，2×Fast Pfu Master Mix具有快速、高灵敏度、抗干扰能力强等特点，能获得更理想的扩增结果，并大幅度缩短扩增反应时间。 特点： - 高保真：具有同Pfu酶相同的保真度，为普通Taq酶的10倍。
- 快速：Fast Pfu扩增速度为普通Pfu酶的数倍，72℃保温30秒可延伸1kb以上。
- 灵敏：可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出特定基因片段（图例一）。
- 快捷：PCR反应所必需试剂全集于一管之中，数分钟即可完成反应体系配置。
- 便利：10μl, 25μl 或50μl体系全部适用。
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产品用途：
用于要求保真度比较高的PCR反应，包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突变、全基因合成等（参见 SinoBio 实验方案）。 使用建议：
Fast Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平滑末端，无3'端"A"突出，其PCR产物的克隆有两种方案：
1.PCR前引物进行5'端加***修饰或将PCR产物***酸化处理后再直接克隆于平滑末端的载体中（参见 SinoBio 实验方案）。
2.将产物3'末端加A后再与T-Vector连接（参见 SinoBio 实验方案）。
*由于Fast Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3′端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度，理想的引物长度为20-30碱基。另外为了减少由3′- 5′外切酶活性引起的引物降解，尽量在冰上配置反应体系。 图例一） 5 0 μ l 扩增体系中， 分别以50ng～0.05ng人基因组DNA为模板，可对特定基因片段（1.2kb）进行很好的扩增。
模板量:
泳道M：DL2000 DNA Marker
泳道1：50ng； 泳道2：5ng；
泳道3：0.5ng； 泳道4：0.05ng； | 
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| 1X Fast Pfu Master Mix成份：
25 units/ml Pfu DNA 聚合酶；
1X反应缓冲体系, dATP, dGTP, dCTP, dTTP各200μM, 2mM MgCl2 活性定义：
在74℃条件下，30分钟内催化10nmol dNTP的
掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。 质量保证：
经多次柱纯化，SDS-PAGE检测纯度大于95%；
PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留，无核酸内、外切酶污染。 常用反应体系（50μl） 2X Fast Pfu Master Mix | 25μl | 上游引物 | 0.2-1.0μM(终浓度) | 下游引物 | 0.2-1.0μM(终浓度) | 模板 | 1-50ng（质粒）
10ng-1μg(基因组) | ddH2O | 至50μl |
常用PCR循环
当扩增片段<3K： 94℃ | 1分钟30秒 | 30次循环 | 94℃，30秒
→57℃30秒
→72℃，30秒/1kb
根据产物长度调整 | 72℃ | 5分钟 | 4℃ | 保温 |
当扩增片段≥3K（推荐引物长度≥30bp）： 94℃ | 20秒 | 30次循环 | 94℃，5秒
→68℃30秒/1kb
根据产物长度调 | 72℃ | 5分钟 | 4℃ | 保温 |
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