产品描述: 本制品是将PCR反应所需的SinoBio Hot Start Taq Plus酶、dNTP混合物、MgCl2以及反应缓冲液预先配置成2倍浓度的混合物。使用时只需加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应,大大地简化了操作过程,减少了PCR操作过程中的污染。本制品所使用的SinoBio Hot Start Taq是经特殊工艺处理后的Taq酶,在加热至高温前,其聚合酶活性被抑制,从而抑制低温条件下由引物的非特异性退火或引物二聚体引起的非特异性扩增。SinoBio Hot Start Taq Plus在PCR反应最初的DNA变性步骤后已恢复活性,因此无需特殊失活处理,在常规PCR反应条件下即可使用。 本制品适用于高特异性PCR反应、Multiplex PCR、高GC含量(>60%),有二级结构等有较强背景的基因组扩增的扩增和大规模基因组扩增检测。 特点: - 简便:无需要专门的高温复性步骤,在PCR第一次升温变性过程中即可完全恢复活性,可在所有正常PCR程序中实现热启动PCR的效果。
- 高效:有效减少了杂带及拖带产生,从而实现高特异性的PCR(图例二)。
- 灵敏:可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出特定基因片段。
- 稳定:经测试,反复冻融40次后,扩增性能仍不受影响。
- 快捷:PCR反应所必需试剂全集于一管之中,数分钟即可完成反应体系配置。
产品用途: 1)高特异性PCR反应; 2)复杂模板扩增; 3)Multiplex PCR; 4)基因组扩增检测; 5)大片段PCR扩增反应 (可达 20 kb); 使用建议: 使用本制品扩增得到的PCR产物具有3'端"A"突出,因此可直接克隆于T-Vector中。 图例一) 50μl扩增体系中,以50ng人基因 组DNA为模板,SinoBio Hot Start Taq plus 可对特定基因片段(170bp)进行高特异性扩增。 泳道M:DL2000 DNA Marker; 泳道1:Taq酶 1.25U; 泳道2: Hot Start Taq酶,1.25U | 
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| 1X Hot Start Taq Plus Master Mix成份: 25 units/ml of Hot Start Taq Plus DNA 聚合酶;1X反应缓冲体系 (pH 9.1), dATP, dGTP, dCTP, dTTP各200μM, 1.5mM MgCl2。 活性定义: 在74oC条件下,30分钟内催化10nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。 质量保证: 经多次柱纯化,SDS-PAGE检测纯度大于95%;PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留,无核酸内、外切酶污染。 常用反应体系(50μl) 2X Taq Plus Master Mix 25μl | 上游引物 | 0.2-1.0μM(终浓度) | 下游引物 | 0.2-1.0μM(终浓度) | 模板 | 1-50ng(质粒) 10ng-1μg(基因组) | ddH2O | 至50μl | *Mg2+终浓度为2mM |
常用PCR循环 当扩增片段<3K: 预变性 | 94oC, 1分钟30秒 | 30次 循环 | 94oC,30秒 57oC,30秒 72oC,根据产物长度调整, 60秒/1kb | 延伸 | 72oC 5分钟 | 保温 | 4oC 保温 |
当扩增片段≥3K(推荐引物长度≥30bp): 预变性 | 94oC, 20秒 | 30次循环 | 94oC,5秒 68oC,根据产物长度调整, 60秒/1kb | 延伸 | 72oC 5分钟 | 保温 | 4oC 保温 |
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