TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒HRP显色系统
英文名称： no
型号:null    产品货号： TUNEL-H1
价格:请致电：010-57128832,18610462672
品牌: 北京

TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒

（HRP检测系統）

一、概述

TUNEL技术是分子生物学与形态学相结合的研究方法，对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色，能准确的反映细胞凋亡最典型的生物化学和形态特征，其灵敏度远比一般的组织化学和生物化学测定法要高，因而在细胞凋亡的研究中已被广泛采用。本试剂盒适用于组织样本（石蜡或冰冻切片）和细胞样本（细胞爬片）的凋亡原位检测。

产品名称

显色系统

产品编号

TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒

HRP显色系统

TUNEL-H1

二、试剂盒组成

组分

10 T

蛋白酶K溶液

400μl

阻断剂

400μl

标记溶液

180μl

脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）

20μl

封闭液

400μl

HRP-SP

400μl

20XSSC

10ml

三、自备试剂及用品

a)         淋洗缓冲液（鼎国生物：PBS***酸盐缓冲液系列BF-0011/0012/0013/0014）

b)        蒸馏水

c)         复染剂（鼎国生物：AR-0711/0712/0721/0722/0771/0772）

d)        封片剂（鼎国生物：AR-0811）

e)         孵育盒（鼎国生物：AR-0951/0952）

f)         定时器（鼎国生物：AR-0961/0962）

g)        显微镜

h)        DAB显色剂（鼎国生物：AR-0611/0612/0613）

四、不同类型标本的处理方法：

实验用玻片：清洗干净，用多聚赖氨酸或APES进行处理。

细胞爬片

固定液：4% 多聚甲醛（pH7.4 PBS溶液配制）室温固定30min。0.01M PBS洗3次，5min/次。

渗透液：0.1% Triton X-100（溶于1XSSC溶液）冰浴2-10min。

石蜡组织切片

二甲***和梯度乙醇100%、95%、75%、50%，常规脱蜡入水。

10～20ug/ml蛋白 酶K 37℃ 5～30min（可根据标本新旧厚薄调整消化时间）。

冰冻组织切片

固定液：4% 多聚甲醛（pH7.4 PBS溶液配制）室温固定30min。0.01M PBS洗3次，5min/次。

渗透液：0.1% Triton X-100（溶于1XSSC溶液）冰浴2-10min。

五、             标本处理后的操作

1.  0.01M PBS洗2×5min，除去PBS液，加入阻断剂，暗盒中室温孵育10min。

2.  0.01M PBS洗2×5min。

3.  制备TUNEL反应混合液：处理组用TdT酶和标记溶液体积比1：9混合；阴性对照不加酶，以去离子水代替。

4.  除去PBS液，加TUNEL反应混合液于标本上，暗盒中37℃孵育1-2h。

5.  浸入2XSSC15min终止反应。

6.  0.01M PBS洗5min，除去PBS液，滴加封闭液，37℃孵育10min。不洗，弃封闭液。

7.  滴加HRP-SP，37℃孵育30min。

8.  0.01M PBS洗3×5min，除去PBS液，每片滴加50μl DAB显色工作液，置于避光湿盒中显5-30min。显微镜下观察无背景出现可继续显色。

9.  DAB 染色后，自来水冲洗，苏木素复染。

10. 复染后，蒸馏水洗，脱水，透明，封片。

结果观察：显微镜下观察细胞核有黄褐色颗粒者为阳性。

六、保存和有效期：

   -20℃保存，1年有效。

为了您的安全和健康，请穿戴实验服和手套操作！

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