Solarbio Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd Tel: 010-56371210 Http://www.solarbio.com 支原体检测试剂盒 货号：CA1080 保存：4℃保存，有效期为 2 年，Hoechst 工作液需要避光保存。 产品内容： Hoechst 33258 工作液 50ml 固定液 50ml 抗荧光衰减封片液 10ml 说明书 1 份 产品简介： 本试剂盒是利用荧光染料

（bisbenzimide,Hoechst 33258）检测支原体污染。这种染料会结合到 DNA的 A-T 富 集区域，因为支原体的 DNA 中 A-T 含量高（55％～80％），所以可将其染色而被检测到。被支原体污染的 细胞经染色后在细胞周围可看到许多大小均一的荧光小点，即为支原体的 DNA染色斑，说明有支原体污染。 Hoechst 33258 的最大激发波长为 346nm，最大发射波长为 460nm；Hoechst 33258 和双链DNA结合后，最大 激发波长为 352nm，最大发射波长为 461nm。 操作步骤： 贴壁细胞： 1、被检细胞接种于无菌的 6 孔细胞培养板中，接种密度为 1-2×104 。同时，接种正常无支原体感染的同种细 胞，作为阴性对照。 2、5 天后，先吸去培养液，再加入 1ml 的固定液，静置 20min， 3、吸去固定液，晾干。 4、于每孔中，加入 1ml 的 Hoechst33258 工作液（Hoechst 33258 工作液须覆盖全部被检细胞），37℃避光放 置 15-20min 或室温静置 20～30min。 5、吸去 Hoechst 33258 工作液，加入 2ml 灭菌超纯水洗涤三次，直接风干。风干后加入一滴封片液，并以盖 玻片覆盖。 6、荧光显微镜观察。用紫外激发光激发，观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状荧光小点。 悬浮细胞： 1、收集需检测的细胞，1500rpm，5min。 2、将收集的细胞涂片于载玻片上，再加 1ml 的固定液，静置 20min。 3、吸去固定液，晾干。 4、于每孔中，加入 1ml 的 Hoechst33258 工作液（Hoechst 33258 工作液须覆盖全部被检细胞），37℃避光放 置 15～20min 或室温静置 20～30min。 5、吸去 Hoechst 33258 工作液，用无菌水洗涤玻片 3 次，直接风干。风干后加入一滴封固液，并以盖玻片覆 盖。 6、荧光显微镜观察。用紫外激发光激发，观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状荧光小点。 结果判断（参考）： 阴性：仅见细胞的细胞核呈现黄绿色荧光。 阳性：除细胞外，细胞周围可见大量的大小均一的荧光着色颗粒。 注意事项： 1．Hoechst工作液对人体有害，请注意防护。 2．固定液有刺激性气味，建议在通风橱进行固定。 3．支原体检测时，最好用不含抗生素的培养液培养 2～3 代，这样容易避免假阴性结果。 4．本试剂盒用于 6 孔板检测时，可以进行 50 次检测反应。 5．检测支原体污染，可以使用支原体高效 Vero 细胞，这样可以提高检测灵敏度，即将被检测样品接种于 Vero 细胞进行检测。 相关产品： P2100 10×多聚赖氨酸 S2100 抗荧光衰减封片剂 C0020 Hoechst 33258染色液（即用型）