一、原理

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法定量检测样品中黄曲霉毒素M1的残留量。

二、适用范围

定量检测牛乳及其他乳制品等样品中黄曲霉毒素M1的残留。

三、试剂盒特点及技术指标

*  检 测 时 间 ： 30 min

  试剂盒灵敏度： 0.05 ppb(µg/kg)

* 试剂盒检测纯阴性生鲜奶样本的背景值

   ＜ 0.05 ppb，且直接点样；

* 试剂盒提供工作浓度标准品，使用更方便。

试剂盒检测样本的回收率和准确度：

样本	回收率
牛奶	70%-120%
奶粉、奶酪等	70%-120%

试剂盒特异性：

四、所需材料

仪器：微孔板酶标仪450 nm/630 nm、旋转蒸发仪/氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管（10 mL）、天平（感量0.01 g）、洗耳球、离心管（5 mL, 50 mL）、三角瓶（100 mL）

微量移液器：单道 1µL～10 µL、10 µL～100 µL

多道 50µL～300 µL

试剂：去离子水。

五、 试剂盒组成

序号	组成部分	96T装量
1	黄曲霉毒素M1酶标板	12×8孔
2	黄曲霉毒素M1标准品浓度*6	6×1 mL
3	黄曲霉M1高浓度标品100ppb	1 mL
4	黄曲霉毒素M1酶标物	13 mL
5	黄曲霉毒素M1抗体	7 mL
6	底物液A液	7 mL
7	底物液B液	7 mL
8	终 止 液	7 mL
9	10×浓缩洗涤液	40 mL
10	2×黄曲霉M1浓缩样品稀释液	45 mL

*注：6个标准品浓度为：0 ppb, 0.05 ppb, 0.15 ppb,

0.45 ppb, 1.35 ppb, 4.05 ppb，直接使用。

六、 酶标免疫测定程序

①     将所需试剂从冷藏环境中取出，待其完全回  升至室温（20～25℃）后方可使用。注意每种液体试剂使用前均须摇匀。

②  按标准品和样品双孔平行的数量使用微孔。

③     加标准品/样品、抗体：加标准品/样品50µL到对应的微孔中，加入黄曲霉毒素M1酶标物50µL/孔，再加入黄曲霉毒素M1抗体50µL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃避光环境中反应20min。

④  洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，

加入洗涤工作液250µL/孔，每次静置20s，甩去孔内液体，重复洗涤3次，最后一次用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。

⑤   显色：加入底物液A液50µL/孔，再加底物   

液B液50µL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃避光环境中反应10min。

⑥      测定：加入终止液50µL/孔，用酶标仪立即  测定450nm处的吸光度值（建议用双波长450/630nm）检测。

七、 结果判定

以标准品百分吸光率为纵坐标，以黄曲霉毒素M1标准品浓度（ppb）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中黄曲霉毒素M1实际浓度。（详见试剂盒专业分析软件，以便进行大量样本的分析计算。）

八、 注意事项

① 洗板拍干后应立即进行下一步操作。

② 反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。

③ 不使用过了有效期的试剂盒，不交换使用不同批号的试剂。

④ 0标准的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。

⑤ 在加入底物液A液和底物液B液后，一般显色时间为10～15min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到20 min，反之则减短反应时间。

九、贮藏条件及保存期

    贮藏条件： 2～8℃

保 质 期： 12个月