一、原理

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法定量检测样品中赭曲霉毒素A的残留量。

二、适用范围

定量检测粮食、饲料等样本中赭曲霉毒素A残留。

三、试剂盒特点及技术指标

* 检 测 时 间 ：30min

  试剂盒灵敏度： 0.1ppb(µg/kg)

* 试剂盒检测纯阴性样本的背景值＜0.5 ppb；

* 试剂盒提供工作浓度标准品，使用更方便。

试剂盒检测样本的灵敏度和准确度：

样本	检测下限	回收率
谷物、豆类	1ppb	70%-120%
葡萄干等	1 ppb	70%-120%

试剂盒特异性：

药物名称	交叉反应率（%）
赭曲霉毒素A	100%
呕吐毒素	＜2%

 

 

 

 

 

 

 

 

四、所需材料

仪器：微孔板酶标仪450 nm/630 nm、均质器、振荡器、离心机、天平（感量0.01 g）、离心管（5 mL, 50 mL）

微量移液器：单道 1µL～10 µL、10 µL～100µL

多道50µL～300µL

试剂：去离子水

五、 试剂盒组成

*注：6个标准品浓度为：0 ppb, 0.1 ppb, 0.3 ppb, 0.9 ppb, 2.7ppb, 8.1 ppb，直接使用。

六、 酶标免疫测定程序

①     将所需试剂从冷藏环境中取出，待其完全回  升至室温（20～25℃）后方可使用。注意每种液体试剂使用前均须摇匀。

②  按标准品和样品双孔平行的数量使用微孔。

③  加标准品/样品、抗体：加标准品/样品50µL

到对应的微孔中，加入赭曲霉毒素A酶标物50µL /孔， 再加入赭曲霉毒素A抗体50µL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃避光环境中反应30min。

④  洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，

加入洗涤工作液250µL/孔，每次静置20s，甩去孔内液体，重复洗涤3次，最后一次用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。

⑤  显色：加入底物液A液50µL/孔，再加底物   

液B液50µL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃避光环境中反应15～20min。

⑥      测定：加入终止液50µL/孔，用酶标仪立即  测定450nm处的吸光度值（建议用双波长450/630nm）检测。

 

七、 结果判定

以标准品百分吸光率为纵坐标，以赭曲霉毒素A标准品浓度（ppb）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中赭曲霉毒素A实际浓度。（详见试剂盒专业分析软件，以便进行大量样本的分析计算。）

八、 注意事项

① 洗板拍干后应立即进行下一步操作。

② 反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。

③ 不使用过了有效期的试剂盒，不交换使用不同批号的试剂。

④ 0标准的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。

⑤ 在加入底物液A液和底物液B液后，一般显色时间为15～20min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到30min，反之则减短反应时间。

九、贮藏条件及保存期

    贮藏条件： 2～8℃

保 质 期： 12个月